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Roche
DIG RNAラベリングキット（SP6/T7）
sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting
別名:
DIGシステム, rna標識
usage
sufficient for 2 x 10 labeling reactions
packaging
kit of 1 (12 components)
manufacturer/tradename
Roche
greener alternative product characteristics
Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.
sustainability
Greener Alternative Product
technique(s)
Northern blotting: suitable, Southern blotting: suitable, hybridization: suitable
greener alternative category
, Aligned
storage temp.
−20°C
Quality Level
General description
アッセイ時間：145分
サンプル材料
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。
サンプル材料
- 直線化プラスミドDNA
- PCR生成物
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。
SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのジゴキシゲニン-UTPラベリングのためのキット。この方法により、既知の長さの一重鎖RNAプローブが生成され、幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます。
メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。 DIGシステムは、放射活性を用いて核酸の標識付けと検出を行う方法に対する、感度が高くコスト効率に優れた代替方法として確立されました。DIGシステムの多用途性を証明する多くの刊行物が入手できるため、放射標識を使用することは、ハイブリッド形成法用にDNAを標識する唯一のオプションではなくなりました。
Application
SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのDIG-11-UTPラベリング。DIG標識され「ランオフ」された転写物が高い効率で合成され、以下のような幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます：
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。
- ノーザンブロット
- サザンブロット
- In situハイブリダイゼーション
- プラークまたはコロニーリフト
- RNアーゼプロテクション実験
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。
Biochem/physiol Actions
感度および特異性
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。
Packaging
1つのキットには12のコンポーネントが含まれています。
Analysis Note
原理：転写されるDNAテンプレートが、SP6および/またはT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクターのポリリンカーサイトに複製されます。適切な部位における直線化の後、DIG-UTPの存在下でRNAが転写されます。標準的な条件下では、約10 μgのDIG標識化完全長RNAが、1 μgのテンプレートから転写されます。
Other Notes
ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
- pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
- Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
- Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
- NTP Labeling Mixture 10x concentrated
- Transcription Buffer 10x concentrated
- DNase I, RNase-free 10 U/µl
- Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
- SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
- T7 RNA Polymerase 20 U/µl
すべて表示 (12)
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
保管分類
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 2
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
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資料
Digoxigenin (DIG) labeling methods and kits for DNA and RNA DIG probes, random primed DNA labeling, nick translation labeling, 5’ and 3’ oligonucleotide end-labeling.
DNAおよびRNA DIGプローブ用のジゴキシゲニン（DIG）による標識方法とキット、ランダムプライミングによるDNA標識、ニックトランスレーションによる標識、5'および3'オリゴヌクレオチド末端標識。
プロトコル
Determine the labeling efficiency in terms of μg (expected yield of a standard labeling reaction is 20 μg of DIG labeled RNA per μg linearized template DNA after the DIG RNA labeling reaction).
µg単位で標識効率を判定します（標準的な標識反応の予想収量は、DIG RNA標識反応後の線形化されたテンプレートDNA 1 µgあたり20 µgのDIG標識RNAです）。
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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