5-ブロモ-2′-デオキシ-ウリジン標識および検出キットI

このキットは、免疫蛍光顕微鏡を用いた、細胞DNAに取り込まれたBrdUの検出に使用されます。細胞または器官培養物のin vitro標識、あるいは凍結またはパラフィン包埋組織切片を固定前に調製しなければならないin vivo標識のいずれかによるDNA合成の検出に使用されます。
通常、抗体の結合はDNAの変性によってのみ達成されます。これは通常、細胞を酸、塩基、または熱にさらすことによって得られます。これらの手順は、細胞形態ならびに表面および細胞質マーカーを含む細胞統合性の破壊をもたらします。
BrdU標識および検出キットIはこれらの問題を回避します。抗体調製物は、酸性エタノール中で固定した後にBrdUへのアクセスを可能にする特異的ヌクレアーゼを含みます。そのため、他のマーカーの同時検出（二重染色）も可能です。

BrdUであらかじめ標識されたサンプルをエタノールで固定し、次いでBrdUに対するモノクローナル抗体と共にインキュベートします。キットに同梱されているBrdUに対する抗体には、最適化されたヌクレアーゼ混合物が含まれています。これらのヌクレアーゼは一本鎖DNAフラグメントを生成し、それにより細胞形態を壊さずに抗体がBrdUへ結合できるようになります。マウス免疫グロブリンに対するフルオレセイン標識抗体を添加し、次いで抗BrdU抗体に結合させます。その後、免疫蛍光顕微鏡を用いてサンプルを評価します。

• 安全：放射性同位体不使用
• 実施しやすい：標準の免疫蛍光プロトコルに沿って行います。
• 高感度：ヌクレアーゼでDNAを変性させることにより、BrdUを高感度で検出できます。
• 柔軟性あり：二重標識プロトコルが可能です。

細胞DNAに取り込まれた5-ブロモ-2′-デオキシ-ウリジン（BrdU）の検出には、BrdU標識および検出キットが使用されてきました。

抗BrdUモノクローナル抗体は、5-ブロモ-2′-デオキシ-ウリジンに特異的に結合し、5-ヨード-2′-デオキシ-ウリジンと交差反応性を示します（10%）。抗BrdUは、5-フルオロ-2′-デオキシ-ウリジン、またはチミジンもしくはウリジンなどの任意の内因性細胞成分と交差反応性を示しません。

1キットに5構成要素が含まれています。

細胞増殖は、放射性同位体、[3H]-チミジンの細胞DNAへの取り込みとそれに続くオートラジオグラフィーをモニターすることによって調べることができます。あるいは、5-ブロモ-2′-デオキシ-ウリジン（BrdU）をチミジンの代わりに使用してもよいです。DNAにBrdUを取り込んだ細胞は、BrdUに対するモノクローナル抗体および酵素または蛍光色素結合二次抗体を用いて容易に検出されます。
使用溶液：BrdU標識培地
無菌細胞培養培地でBrdU標識試薬を1:1000に希釈します（最終濃度10 μM）。
注：in vivo標識には、希釈していないBrdU標識試薬（1〜2 ml/体重100 g）が必要です。
使用直前に調製してください。
抗BrdU使用溶液
インキュベーション緩衝液で抗BrdU溶液を1:10に希釈します。
使用直前に調製してください。
抗マウスIgフルオレセインストック溶液
抗マウスIgフルオレセイン溶液を1 ml再蒸留水に溶解します。
抗マウスIgフルオレセイン使用溶液
抗マウスIgフルオレセインストック溶液をPBSで1:10に希釈します。長期保存が必要な場合は、BSA（ウシ血清アルブミン）を10 mg/ml加えます。
使用直前に調製してください。
洗浄緩衝液
洗浄緩衝液濃縮液（10倍）（ボトル2）を再蒸留水で1:10に希釈してください。
保存条件（使用溶液）：BrdU標識培地
希釈していない培地（1000倍）をアリコートに分けて-15〜-25°Cで保存します。
抗BrdU使用溶液
希釈していない抗体を-15〜-25°Cで保存します。
抗マウスIgフルオレセインストック溶液
2～8°Cで安定。
洗浄緩衝液
2～8°Cで安定。
サンプル材料：細胞培養：接着細胞、懸濁細胞、器官、または外植片培養。組織切片（BrdUによるin vivo標識後）。

ライフサイエンス研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。