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Roche

First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)

Name: First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)
Brand: ROCHE

sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions), kit of 1 (10 components), suitable for RT-PCR, hotstart: no, dNTPs included

別名:

RT-PCR, cDNAの合成

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この商品について

UNSPSC Code:

41106313

NACRES:

NA.54

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特性

usage

sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions)

specific activity

>50 units/μg protein

feature

dNTPs included, hotstart: no

packaging

kit of 1 (10 components)

manufacturer/tradename

Roche

parameter

42 °C optimum reaction temp.

technique(s)

RT-PCR: suitable

input

purified RNA

storage temp.

−20°C

詳細

General description

First Strand cDNA Synthesis Kitは、2ステップRT PCRの開始反応である第一鎖cDNAの合成に使用されます。本キットには、第一鎖合成用の逆転写酵素AMV、2つの異なるプライマー、PCR Nucleotide Mix、およびControl Neo pa RNAが含まれています。RT-PCRにより生成されたPCR産物は、標準的な手順を用いてクローニングすることができます。

RNAを増幅させるためには、RNA基質をDNAに変換する必要があります。これは、AMV RT（トリ骨髄芽球症ウイルス逆転写酵素）またはM-MuLV RT（Moloneyマウス白血病ウイルス逆転写酵素）などの逆転写酵素を使用して達成されます。得られたcDNAは、標準的なPCRのテンプレートとして使用することができます。
AMV RTは、以下のとおり、使用するプライマーのタイプにより決定される部位で新しいcDNA鎖を合成します：

Oligo-p（dT）₁₅をプライマーとして使用した場合、poly（A）mRNAの3′末端
ランダムプライマーp（dN）₆を使用した場合、mRNAテンプレートに沿った非特異的ポイント
配列特異的プライマーによって決定された部位

第一鎖cDNA合成にAMV RTを使用することには、特定の利点があります。この酵素の熱安定性は、M-MuLV RTと比べて高いので、反応を+42℃で行うことが可能となるため、+37℃で行われる反応と比べてより高い特異性と二次構造のより良い分解能が得られます。

Application

RT-PCR（AMV）用のFirst Strand cDNA Synthesis Kitは、以下の用途に適しています：

RNAウイルスまたは他のRNA含有微生物の有無の検出（PCRと併用）
特定のmRNAの差次的発現をモニタリングするためのmRNAの定量化
「mRNAのディファレンシャルディスプレイ」の第一工程
長い完全長インサートによる cDNA ライブラリーの作成
RNAの相補的DNAへの逆転写のための逆転写-定量的ポリメラーゼ連鎖反応（RT-qPCR）。

Biochem/physiol Actions

熱失活：5分間、95℃
逆転写酵素AMV

Features and Benefits

堅牢性：

転写が困難な二次RNA構造を有するトータルRNA、mRNA、ウイルスRNAを転写します
最大12kbのcDNA転写産物を取得します
M-MuLV逆転写酵素よりも高い熱安定性（最高50℃）および特異性を示します
PCR反応の前に得られたcDNAを精製する必要はありません

柔軟性：
配列特異的プライマー、poly（dT）15プライマー、またはランダムプライマーp（dN）6のいずれかとともに使用することができます。

Packaging

10種のコンポーネントを含む1キット。

Analysis Note

標準cDNA合成アッセイでは、1.0 μgのNeo pa RNAテンプレートを20 μCi [α-³²P]-dCTP（3000 Ci/mmolの比活性）とともに+42℃で60分間インキュベートすると、少なくとも300 ngのcDNAが合成されます（すなわち、30%の収率）。

Other Notes

ライフサイエンス研究専用です。診断的処置に使用しないでください。

容量活性：20～25 U/μL

キットの構成要素のみ

製品番号

詳細

Reverse Transcriptase AMV

PCR Nucleotide Mix, pH 8.5 10 mM each

Reaction Buffer

MgCl₂ Stock Solution 25 mM

Gelatin 0.05% (w/v)

Oligo-p(dT)₁₅ , 0.02 A₂₆₀ units/μl 0.8 μg/μl

Random Primer p(dN)₆ , 0.04 A₂₆₀ units/μl 1.6 μg/μl

すべて表示 (10)

保管分類

12 - Non Combustible Liquids

wgk

WGK 1

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does not flash

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プロトコル

RNA Handling When Using the First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)

First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV).

First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR（AMV）を使用したRNAの取り扱い方

2ステップRT PCRの開始反応としての第一鎖cDNAを合成します。キットには、逆転写酵素AMV、2種類のプライマー、PCRヌクレオチドミックス、コントロールNeo pa RNAが含まれています。

資料

サンプル調製とゲル電気泳動のトラブルシューティング

SDS-PAGEサンプル調製の際に生じる課題の原因と対応策を特定し、電気泳動条件を最適化しましょう。

Sample Prep & Gel Electrophoresis Troubleshooting

Identify causes and remedies for SDS-PAGE sample preparation challenges and optimize electrophoresis conditions.