cOmplete^™ His-Tag 精製カラム

タンパク質のアフィニティ精製における最も一般的な技術は、6～14 のヒスチジンの配列を、タンパク質の N または C 末端（または露出したループ）へと組み込む方法です。このようなポリヒスチジンのストレッチは、ニッケルやコバルトなどの二価金属イオンに強く結合します。この性質は、タンパク質の分離に使用できます。金属イオンはキレーターを含むマトリクスに固定化でき、このイオンはタンパク質のポリヒスチジンタグと相互作用します。これらの His-タグタンパク質が、固定化された金属イオンを含むカラムを通過するときに、タンパク質はタグを介してカラムに結合します。ほとんど全てのタグを持たないタンパク質が、カラムを通過します。タンパク質は、カラムに結合したポリヒスチジンタグと競合するイミダゾールか、または、タグの樹脂に対するアフィニティを低下させる pH を下げる方法によって、カラムから溶出されます。この手順は、一般的には、アフィニティタグを組み込んだリコンビナントタンパク質の精製に使用される一方で、二価の陽イオンに対して親和性を持つ天然のタンパク質に対しても使用できます。

cOmplete His-Tag 精製カラムは、2種類のサイズが利用でき、cOmplete His-Tag 精製樹脂でパッキングされています。cOmplete His-Tag 精製樹脂は、全ライセートから His-タグタンパク質を簡単にワンステップ精製できる、革新的な高容量 IMAC マトリクス（固定化金属アフィニティクロマトグラフィー）です。ロシュ独自のニッケルキレート化学は、DTTなどの一般的な還元剤、EDTAなどのキレート効果によるメタロプロテアーゼ阻害剤、幅広いバッファー成分および塩の条件に対し、並外れた適合性を保証します。幅広い選択を持った材料適合性により、タンパク質安定性および溶解性を最大化するためのバッファーの最適化が可能です。

cOmplete His-Tag精製カラムは、ÄKTA システム（Cytiva）などの標準的な精製システムに完全に適合します。

• 使用するタンパク質に最適なバッファー条件を使用してください

使用するタンパク質に最適な条件を保ち、精製樹脂ではなくそのタンパク質に従って、DTT、EDTA、または他のバッファー成分を使用するかどうかを決定してください。

• 高純度なタンパク質が繰り返し得られます

レジンを再充填することなくワンステップ精製。

• 有毒なニッケルから使用するタンパク質を保護します

ニッケルが浸出するレジンに起因する、タンパク質の酸化および凝集を低減します。

• 安全で生態系に優しい環境で作業しましょう

毒性のあるニッケルの取り扱いを避け、廃棄費用を完全になくします。

推奨の体積流量：5 mL カラム（06 781 535 001）：2.5～10 mL/分
1 mL カラム（06 781 543 001）：0.5～2.0 mL/分
体積流量は、カラムの横断面に相関します。

ロードおよび洗浄用のイミダゾールの推奨濃度：His-タグのないタンパク質に対して低い非特異吸着性。
ロードおよび洗浄用のバッファーには5 mM 以下のイミダゾールを使用してください。
cOmplete His-Tag 精製カラムで His-タグタンパク質の精製のための新しいアッセイを確立する場合はイミダゾールを使用しないでください。例えば、この最初のステップに従って His-タグタンパク質の純度を改善する必要がある場合は、2 番目のステップで最終濃度 5 mM までイミダゾールを使用してください

溶出用のイミダゾールの推奨濃度：500 mM まで
以下に注意してください：
cOmplete His-Tag 精製カラムからの結合 His-タグタンパク質の溶出は、通常、他の樹脂と比較して低いイミダゾール濃度（25～45 mM）で可能です。

結合容量
様々な種類のタンパク質の樹脂への結合容量は、サイズなどのタンパク質の性質によって異なる可能性があります。
cOmplete His-Tag 精製カラムは、ポリヒスチジンタグを持ったタンパク質に対し、高い特異性で結合します。その結果として、従来の金属キレートマトリクスと比較した場合、結合カイネティクスは異なる可能性があります。cOmplete His-Tag 精製カラムの完全な結合容量は、クロマトグラフィー精製手順の間の流速を低くし、タンパク質の樹脂への結合に時間をかけることによって達成できます。

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

cOmplete is a trademark of Roche