FastStart SYBR Green Master

FastStart SYBR Green Master; 取扱説明書

FastStart^™ SYBR^™ Green Masterは、LightCycler^®装置以外のリアルタイムPCRシステムでの定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）および逆転写（RT）-qPCR用の、ROXを含まないすぐに使用できるホットスタート反応混合液です。このマスター混合液を使用すれば、DNAの検出および分析のための反応液の調製が簡単になります。リアルタイムPCR装置、適切なPCR用プライマーおよび加水分解プローブと組み合わせてFastStart^™ TaqMan^® Probe Masterを使用することにより、特定のDNA配列の非常に高感度な検出および定量化が可能です。
SYBR^™ Green Iは、二本鎖DNA特異的色素です。各段階のDNA合成で、反応混合液に含まれるSYBR^™ Green I色素は、増幅されたPCR産物に結合します。蛍光によりアンプリコンを検出することができます。
ホットスタート産物では、特異性、感度、およびPCR収率が著しく改善されることが証明されています。FastStart^™ Taq DNAポリメラーゼの一部のアミノ酸残基には熱不安定性のブロック基があり、室温ではこれが改変酵素を不活化します。したがって、プライマーが非特異的に結合できる間は、伸長が生じません。FastStart^™ Taq DNAポリメラーゼは、高温（すなわち、+95℃におけるプレインキュベーション段階）でブロック基を除去することにより活性化されます。
FastStart^™ SYBR^™ Green Masterは、GCまたはAT含量が多いDNA配列を含む、あらゆるDNAまたはcDNA標的配列の増幅および検出に使用することができます。しかし、現在使用中の検出プロトコルを、使用する特定のリアルタイムPCR機器に適合させたり、標的ごとに特定のPCRプライマーを設計したりすることが必要になります。
このマスター混合液とメルクのTranscriptor First Strand cDNA合成キットを組み合わせることで、2段階qRT-PCRで優れた結果を得てください。

The FastStart^™ SYBR^™ Green Masterは、SYBR^™ Green I検出のフォーマットで、qPCRおよび2段階qRT-PCに使用されています。これは下記の用途でも使用されています：

• アデノ随伴ウイルス（AAV）力価測定のための定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）
• グリセロアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）と比較した各Col6a1～3遺伝子の発現レベルの測定のためのqPCR
• Gタンパク質共役エストロゲン受容体1（GPER）mRNAの定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）
• 遺伝子発現研究のためのqRT-PCR

LightCycler^®装置以外のあらゆるリアルタイムqPCR装置でFastStart^™ SYBR^™ Green Masterをご使用ください。

• PCRの感度と特異性を改善します:

FastStart Taq DNAポリメラーゼは、この混合物に依存して、ホットスタートPCRによる非特異的増幅産物の生成を最小限にします。

• qPCRの結果の過剰評価を回避します:

SYBR Green Iが結合する量によって定量化されるべき量を実際よりも大きくする可能性のある、非特異的増幅産物およびプライマーダイマーを排除します。

• 広範囲にわたるDNAまたはcDNA標的の増幅と検出を行えます:

GC-またはAT-リッチなものを含めて、長さ500 bpまでの断片を増幅します。LightCycler^®機器以外のあらゆるリアルタイムPCR機器で機能します。

• LightCycler^®機器以外のあらゆるリアルタイムPCR機器を使用することができます:

2種類の配合、すなわちROX基準色素を含む配合と含まない配合の中から1つを選択できます。

• qPCRの準備にかかる時間と労力を削減します:

この、容易に使える2倍濃縮マスター混合液のおかげで、成分の混合、MgCl2の的的、あるいはその他の時間のかかる最適化ステップを行う必要がなくなります。

• キャリーオーバー汚染によって生じる偽陽性の発生を防止します:

この混合物はdUTPを含んでいるので、ウラシル-DNAグリコシラーゼを併用することにより、前回のPCR反応から持ち越された混入DNAを排除することができます。

機能試験: ロットごとに、3種類の鋳型、すなわちGC-リッチの鋳型、AT-リッチの鋳型、および長鎖の鋳型 (約440 bp) を用いてqPCR性能についての試験が行われます。

qPCR標的
原理上、FastStart SYBR Green Masterは、GC-リッチまたはAT-リッチな標的を含めて、あらゆるDNAまたはcDNA標的の増幅および検出に使用することが可能です。しかし、標的ごとに、以下の操作が必要になります:

• 現在使用中の検出プロトコルを、使用する特定のリアルタイムPCR機器に適合させ、
• 標的のための特定のPCRプライマーを設計します。

一般的な推奨事項につきましては、ご使用中のリアルタイムPCR機器の操作者マニュアルをご参照ください。
2種類の形態が利用可能です
マスター混合液は2種類の形態、すなわちROX基準色素を含むものと含まないものを利用できます。
キャリーオーバー汚染を防止します
このマスター混合液にはdUTPが含まれており、これがPCR産物に組み込まれることで、キャリーオーバー汚染によって生じる擬陽性の防止に役立ちます。次のPCRを行う際に、ウラシル-DNAグリコシラーゼを加えて、ウラシルを含むキャリーオーバー汚染物質 (前回のPCRに由来する増幅産物) を分解させることができます。
qRT-PCR
このマスター混合液と弊社の2段階qRT-PCR用Transcriptor First Strand cDNA合成キットを組み合わせます。このキットを用いることで、すべてのリアルタイムPCR機器で良好な結果と作業効率が得られます。

FastStart SYBR Green Masterは2倍濃縮のマスター混合液で、FastStart Taq DNAポリメラーゼ、反応緩衝液、ヌクレオチド (dATP, dCTP, dGTP, dUTP)、およびSYBR Green Iを含んでいます。

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

SYBR is a trademark of Thermo Fisher Scientific or its subsidiaries

FastStart is a trademark of Roche

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.