form
lyophilized (clear, colorless solution after reconstitution)
usage
sufficient for 250 tests (12140349001), sufficient for 50 tests (12140322001)
manufacturer/tradename
Roche
shipped in
wet ice
storage temp.
2-8°C
General description
マウスモノクローナル抗体(クローンM30、マウスIgG2b)は、上皮細胞のアポトーシスの検出に使用されます(サイトケラチン18のカスパーゼ切断産物)。凍結乾燥され安定化されたホルマリングレードの形態で提供されます。
アポトーシスでは、細胞内の重要なタンパク質は切断されます。このプロセスを媒介するプロテアーゼは、カスパーゼ(システイニル-アスパラギン酸プロテアーゼ)と呼ばれます。カスパーゼは酵素前駆体として発現し、様々なアポトーシス誘導物質によって活性化されます。一度活性化されると、単一のカスパーゼがカスパーゼのカスケード反応を活性化します。最近まで、サイトケラチン、特にサイトケラチン18(CK18)は、アポトーシスの初期イベントの影響を受けることは知られていませんでした。最近、M30抗体がサイトケラチン18内の特定のカスパーゼ切断部位を認識することが示されました。これは正常細胞の元々あるCK18では検出されません。そのため、M30 CytoDEATH抗体は、単一細胞および組織切片の最初期のアポトーシスイベントを簡単かつ信頼性の高い方法で測定するためのユニークなツールです。
アポトーシスでは、細胞内の重要なタンパク質は切断されます。このプロセスを媒介するプロテアーゼは、カスパーゼ(システイニル-アスパラギン酸プロテアーゼ)と呼ばれます。カスパーゼは酵素前駆体として発現し、様々なアポトーシス誘導物質によって活性化されます。一度活性化されると、単一のカスパーゼがカスパーゼのカスケード反応を活性化します。最近まで、サイトケラチン、特にサイトケラチン18(CK18)は、アポトーシスの初期イベントの影響を受けることは知られていませんでした。最近、M30抗体がサイトケラチン18内の特定のカスパーゼ切断部位を認識することが示されました。これは正常細胞の元々あるCK18では検出されません。そのため、M30 CytoDEATH抗体は、単一細胞および組織切片の最初期のアポトーシスイベントを簡単かつ信頼性の高い方法で測定するためのユニークなツールです。
- アッセイ時間:細胞の免疫蛍光では2時間、組織の染色では3.5時間(脱ロウを除く)
- サンプル材料:接着細胞、組織サンプル(通常固定およびパラフィン包埋された組織切片、クリオスタット薄切切片)
Application
M30 CytoDEATH抗体は、カスパーゼによる切断後に提示されるサイトケラチン18の特定のエピトープを検出することにより、細胞および組織切片の初期のアポトーシスイベントの検出に使用されます。M30抗体を固定サンプルに適用し、免疫組織化学、免疫細胞化学、およびフローサイトメトリーに適した二次検出システムを使用して、アポトーシスを検出します。
Biochem/physiol Actions
M30 CytoDEATH抗体は、サイトケラチン18(CK 18)細胞骨格タンパク質のカスパーゼで切断された、ホルマリン耐性のエピトープに結合します。抗体の免疫反応性は、アポトーシスした細胞の細胞質に限定して認められます。
Features and Benefits
- 便利さ:使いやすい標準プロトコール
- 明確な結果:アポトーシス細胞は正常細胞から最も簡単に区別できます
- アポトーシスの早期検出:カスパーゼで切断されたサイトケラチン18を検出します。カスパーゼ活性は最初期のアポトーシスマーカーの1つです
- パラフィン包埋組織に有用:通常固定された組織サンプルに有用。過去の試料の研究が可能です
Physical form
白色の凍結乾燥物。抗体は、タンパク質安定剤の存在下で凍結乾燥されています。
Preparation Note
作業濃度:保存溶液の濃度は、6.6 ng/μLです。本製品のQC出荷試験では、添付文書に記載されているように、細胞モデル(TNF-α/アクチノマイシンDで処理したHeLa細胞)を使用した機能試験を実施します。タンパク質の量は、ストック製品のQC出荷テストの一部にすぎないため、ドキュメントには含まれていません。
標準溶液:細胞内の免疫蛍光法とフローサイトメトリーの手順
他の検出方法または検体を使用する場合、条件が異なる場合があり、適合させる必要があります。
ご利用の際は、インキュベーションバッファー(M30 CytoDEATH)で抗体原液を希釈します。
注:抗体溶液には沈殿物を認めないはずです。必要に応じて、使用前に溶液を高速で遠心します。
免疫蛍光およびフローサイトメトリーの手順に必要な追加の作業溶液:
洗浄バッファー:0.1%Tween 20を含むPBS
インキュベーションバッファー:BSAおよび0.1%Tween 20を含むPBS
免疫組織化学の手順
他の検出方法または検体を使用する場合、条件が異なる場合があり、適合させる必要があります。
インキュベーションバッファーで抗体原液を希釈します。
注:抗体溶液には沈殿物を認めないはずです。必要に応じて、使用前に溶液を高速で遠心します。
免疫組織化学染色の手順に必要な標準溶液
洗浄バッファー:0.1%Tween 20を含むPBS
インキュベーションバッファー:BSAおよび0.1%Tween 20を含むPBS
クエン酸バッファー:2 g/Lクエン酸、1 N NaOHでpH 6に調整
保管条件(作業溶液):抗体原液は、2~8℃で6ヵ月間安定です。あるいは、-15~-25℃で分注量で保存できます。
注:凍結融解を繰り返さないでください。
標準溶液:細胞内の免疫蛍光法とフローサイトメトリーの手順
他の検出方法または検体を使用する場合、条件が異なる場合があり、適合させる必要があります。
ご利用の際は、インキュベーションバッファー(M30 CytoDEATH)で抗体原液を希釈します。
注:抗体溶液には沈殿物を認めないはずです。必要に応じて、使用前に溶液を高速で遠心します。
免疫蛍光およびフローサイトメトリーの手順に必要な追加の作業溶液:
洗浄バッファー:0.1%Tween 20を含むPBS
インキュベーションバッファー:BSAおよび0.1%Tween 20を含むPBS
免疫組織化学の手順
他の検出方法または検体を使用する場合、条件が異なる場合があり、適合させる必要があります。
インキュベーションバッファーで抗体原液を希釈します。
注:抗体溶液には沈殿物を認めないはずです。必要に応じて、使用前に溶液を高速で遠心します。
免疫組織化学染色の手順に必要な標準溶液
洗浄バッファー:0.1%Tween 20を含むPBS
インキュベーションバッファー:BSAおよび0.1%Tween 20を含むPBS
クエン酸バッファー:2 g/Lクエン酸、1 N NaOHでpH 6に調整
保管条件(作業溶液):抗体原液は、2~8℃で6ヵ月間安定です。あるいは、-15~-25℃で分注量で保存できます。
注:凍結融解を繰り返さないでください。
短いプロトコール
ホルマリン包埋組織の場合:
細胞の免疫蛍光検査の場合:
ホルマリン包埋組織の場合:
- ホルマリン固定され、パラフィン包埋された組織切片を脱ロウします。
- クエン酸バッファーで加熱して抗原を賦活化します。
- M30抗体を添加します。
- 抗マウスビオチンを添加します。
- ストレプトアビジン-PODを添加します。
- 基質溶液(DABまたはAEC)を添加します。
- ハリスヘマトキシリンによる対比染色を行います。
- 光学顕微鏡下で検鏡します。
細胞の免疫蛍光検査の場合:
- 細胞を固定します。
- M30抗体を添加します。
- 抗マウスIgフルオレセインを添加します。
- 蛍光顕微鏡下で検鏡します。
抗体原液を作成するために、凍結乾燥物を550 μLの水に溶解します。
Other Notes
ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。
Legal Information
M30抗体は、スウェーデンのPeviva ABからのライセンス契約に基づいて作成されています。
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