プロテクターRNアーゼ阻害薬

内容物
プロテクターRNアーゼ阻害薬（40 U/µL）の下記保存緩衝液溶液：20 mM HEPES-KOH、50 mM KCl、8 mM ジチオトレイトール、50%グリセロール（v/v）、pH 約7.6（+4℃）。

プロテクターRNアーゼ阻害薬は、下記を含む広範囲のRNアーゼを不活性化します：

• RNアーゼA
• RNアーゼB
• RNアーゼT2

したがって、プロテクターRNアーゼ阻害薬は、RNアーゼが問題を生じ得るあらゆるアプリケーションで、RNアーゼによるRNAの分解を防ぐことに役立ちます。例として、下記の用途があります：

• cDNA合成反応、RT-PCR（従来のサーマルサイクラーおよびqPCRシステム）またはin vitro転写／翻訳反応でのmRNAの保護
• in vitroウイルス複製中のウイルスRNAの保護
• RNAの単離および精製中のRNアーゼの阻害
• RNアーゼプロテクションアッセイでの使用
• RNアーゼ不含の抗体を作成する支援

注：プロテクターRNアーゼ阻害薬は、通常RNAの調製や分析に使用される酵素を妨げません。

プロテクターRNアーゼ阻害薬は、下記の用途で使用することができます：

• cDNA合成反応、LightCycler^®装置などを用いたRT-PCR（従来のサーマルサイクラーおよびqPCRシステム）、in vitro転写／翻訳システム、RNアーゼプロテクションアッセイおよびin vitro RNA合成でのmRNAの保護
• In vitroウイルス複製中のウイルスRNAの保護
• RNAの単離および精製中のRNアーゼの阻害
• RNアーゼ不含の抗体を作成する支援
• In situハイブリダイゼーション用のRNAプローブの合成

これはRNアーゼが問題となり得るあらゆるアプリケーションで有用です。

プロテクター RNase 阻害剤（20 U/ 20μ l 反応）は、RNase A を最大 1 ng、RNase B を最大 160 pg、RNase T2 を最大 0.03 U/μl 反応量まで阻害します。


RNase H はプロテクター RNase 阻害剤によって阻害されません。


熱不活化： > 65°C

実用濃度：

• One-step RT-PCRでは5～10 U
• ツーステップRT-PCRでは25～50 U
• in vitro転写の場合は20 U

RNアーゼの汚染物質が原因で特定のサンプルで増幅が困難になることが疑われる場合は、RT-PCRにおけるプロテクターRNアーゼ阻害薬の濃度を高くすることができます。この阻害薬は反応を妨害しません。（検査システムでは、16倍の高濃度でも阻害薬はRT-PCRを妨害しませんでした。）

プロテクターRNアーゼ阻害薬の各ロットは、チタンワンチューブRT-PCRキットおよびライトサイクラーDPDキットを用いて機能検査をしています。プロテクターRNアーゼ阻害薬は後述のように汚染の活性度の検査をしています。
検査用緩衝液：50 mM トリス-HCl、10 mM MgCl₂、0.1 mM EDTA、7 mM β-メルカプトエタノール；pH 7.5（+37℃）。
エンドヌクレアーゼの欠如：λDNAのEcoRl/HindIII*-フラグメント1 µgを、50 µLの検査用緩衝液中+37℃で1時間プロテクターRNアーゼ阻害薬と共に培養しました。バアンドパターに変化を生じない阻害薬の量は「エンド（Endo）」を付して記載します。
ニッキング活性の欠如：1 µgのスーパーコイルpBR322 DNAを、50 µLの試験緩衝液中+37℃で1時間プロテクターRNアーゼ阻害薬と共に培養しました。スーパーコイルDNAの緩和を生じない阻害薬の量は「ニック（Nick.Act）」を付して記載します。
リボヌクレアーゼの欠如(1)：5 µgのMS2 RNAを、最終容量50 µLで37℃で1時間プロテクターRNアーゼ阻害薬と共に培養しました。MS2 RNAの分解を生じない阻害薬の量は「RNアーゼ1（RNase1）」を付して記載します。
リボヌクレアーゼの欠如(2)：5 µgのMS2 RNAを、最終容量50 µLで、最初に+37℃で1時間、次に+65℃で10分間、プロテクターRNアーゼ阻害薬と共に培養しました。The MS2 RNAの分解を生じない阻害薬の量は「RNアーゼ2（RNase2）」を付して述べます。

1単位のプロテクターRNアーゼ阻害薬は5 ngのRNアーゼAの活性の50%を阻害するのに必要なタンパク質の量として定義されます。

ユニットアッセイ：活性は、ブラックバーンにしたがって環状シチジン-2′,3′-モノリン酸の加水分解を阻害する能力として測定しました。アッセイ条件下、200 UのプロテクターRNアーゼ阻害薬は1 µgのRNアーゼAの活性の50%を阻害します。

容量活性：40 U/µL

製品規格：
データ源：ラット肺；製品はE. coliで産生された組み換え体です
等電点：pH 4.5
プロテクターRNアーゼ阻害薬が活性である温度：25℃～+55℃；+60℃でも部分的活性は測定できます
失活：厳しい変性条件（+65℃を超える温度）で、この阻害薬は失活します
生物汚染度：< 50 cfu/mL
DNA含量：< 100 pg/mg

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断用には使用できません。

購入の際の注意：ライセンスの免責事項
本製品は、F.ホフマン・ラ・ロシュ社（「ロシュ」）が所有する特許の対象であるポリメラーゼ連鎖反応（PCR）で使用するため最適化されています。これらの特許に基づくPCRプロセスを使用するためのライセンスは、本製品を購入することによって購入者に明示的にも黙示的にも伝えられることはありません。特定の研究および開発活動にPCRプロセスを使用するためのライセンスは、認可されたサーマルサイクラーと組み合わせて使用される場合あるいはアプライド・バイオシステムズから入手可能である場合に、特定のロシュ、アプライド・バイオシステムズまたはその他の認可された供給会社の試薬の購入に伴います。診断目的にはロシュのライセンスが必要です。ライセンス購入について追加情報が必要な場合は以下へお問い合わせください。ライセンス管理者、アプライド・バイオシステムズ、850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

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