Duolink^® In Situ Probemaker PLUS

ご使用になる一次抗体（IgGクラス、モノまたはポリクローナル）を標準免疫蛍光（IF）アッセイ、免疫組織染色（IHC）アッセイまたは免疫細胞染色（ICC）アッセイで検査し、最適な固定、ブロッキングおよび力価の条件を確認してください。Duolink^®in situ試薬は、固定細胞、サイトスピン細胞、スライド上で増殖した細胞、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）切片、または組織 （新鮮または凍結）への使用に適しています。細胞の最小数は不要です。

私たちはお客様と協力して作業します。私たちのカスタム・サービス・プログラムに対する理解が深まると、お客様のDuolink^®プロジェクトが加速されます。

Duolink^®全製品のリストをご覧ください。

完全なDuolink^® PLA in situ実験を実施するためには、2つのターゲット抗原を認識する2つの一次抗体が必要です（PLA、IHC、ICCまたはIFで使用可能）。その他の必要な試薬は、異なる種由来の一対のPLAプローブ（1つはPLUS、1つはMINUS）、検出試薬、洗浄バッファー、およびマウント剤などです。一次抗体は、Duolink^® PLAプローブとして同じ種に由来するものでなければならないことに注意してください。分析は免疫蛍光アッセイ標準装置を用いて行います。HRPは明視野検出にも利用できます。

特異性
Duolink^® In Situ Probemakerは、特定のアッセイ要件に合わせてお客様独自のPLAプローブを作成できるようにし、お客様の可能性をさらに拡大します。

• ホモダイマーの研究
• 同じ種由来の2つの一次抗体を用いたタンパク質間相互作用の研究
• あらゆる種に由来する一次抗体を用いたタンパク質間相互作用の研究

Duolink^® In Situ Probemaker PLUSとMINUSを使用すると、素早く便利な手順でPLUSとMINUSのオリゴアームをお客様の抗体に直接結合させるだけで済みます。独自の機能がもたらされるだけでなく、Duolink^® In Situアッセイを実施するために一次抗体をどの種から得なければならないのかという制限がなくなることになります。

アプリケーションノート
接合される抗体の濃度は1 mg/mLでなければなりません。20 mLを超える容量は接合に使用しないでください。抗体はアミンフリーのバッファー、望ましくはPBS中になければなりません。バッファーは無担体とすべきですが、0.1%までのBSA、5%までのトレハロース、および0.02%までのアジ化ナトリウムを含んでいても構いません。

• 2つに分割したモノクローナル抗体の1つを用いてホモダイマーを研究します。1つはPLUSオリゴで、もう1つはMINUSオリゴで標識します。
• 同一種に由来する抗体を使用します。タンパク質間相互作用、タンパク質修飾または単一タンパク質は、同じ種に由来する2つの一次抗体を用いて研究します。抗体のうちの1つはPLUSオリゴで、もう1つはMINUSオリゴで標識します
• いずれかの種に由来する抗体を使用します。マウス、ウサギまたはヤギ以外の種由来の一次抗体を一方または両方に使用してタンパク質間相互作用、タンパク質修飾または単一タンパク質を研究します。お客様の二次抗体の1つはPLUSオリゴで、もう1つはMINUSオリゴで標識します。あるいは、標識した1種類の二次抗体を標準二次Duolink^®In Situ PLAプローブと組み合わせてください。

Duolink^®近接ライゲーションアッセイ（PLA^®）では、固定化細胞や組織試料において、タンパク質相互作用、翻訳後修飾、タンパク質発現量を単一分子レベルで内因的に検出することができます。

Duolink^® In Situ Probemaker PLUS/MINUSをご使用の際は、Duolink^® In Situ Probemakerプロトコールに従ってください。本製品は、使用する検出試薬に応じて、Duolink^® In Situ Fluorescenceプロトコール及びDuolink^® In Situ Brightfieldプロトコールの両方に適用できます。詳細につきましては「独自のPLA^®プローブを作成する（Create Your Own PLA Probes）」をご参照ください。

Duolink^®実験の方法、アプリケーション、トラブルシューディングなどに関する情報につきましては、弊社Duolink^® PLA リソースセンターをご確認ください。

本製品は以下で構成されています：

• Duolink^® In SituオリゴヌクレオチドPLUS ― 1バイアルに、抗体20 μgの標識1回分の活性化PLUSオリゴヌクレオチドが凍結乾燥されています
• コンジュゲーションバッファー ― コンジュゲーション反応用のバッファーです
• 停止試薬 ― コンジュゲーション反応を停止させます
• 保存溶液 ― 調製されたPLAプローブ（標識抗体）を保存するためのバッファーです
• 20x アッセイ試薬 ― 実験者が最適化した抗体希釈液に添加する試薬です
• ブロッキング溶液 ― Duolink^® In Situによる染色の前に、試料をブロッキングします
• PLAプローブ希釈液 ― PLAプローブ（標識抗体）を最終アッセイ濃度に希釈するためのバッファーです

さらなる詳細につきましてはデータシートをご参照ください。

Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany