トリプシン ウシ膵臓由来

ペプチドのトリプシン消化には、トリプシン：ペプチドに対して約1：100から1：20の比率を使用します。この製品の一般的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。基質から細胞を取り除くのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞の種類と培養期間に依存します。トリプシンは、細胞培養中の細胞の再懸濁、タンパク質の消化のためのプロテオミクス研究、および様々なゲル内消化にも使用されています。その他の用途には、膜ベースの手法による結晶化の評価や、タンパク質フォールディング速度と収量が動的トラップの存在によって制限されうることを確認する研究が含まれます。

トリプシンは、リジンおよびアルギニン残基のC末端側のペプチドを切断します。酸性残基が切断部位の両側にある場合、この反応の加水分解速度は遅くなり、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合、加水分解は停止します。トリプシン活性の至適pHは7～9です。また、トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステルおよびアミド結合を切断するよう作用します。EDTAは、トリプシンが作用するペプチド結合を不明瞭にするカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤としてトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると、酵素活性が増加します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

1 mg/mLの濃度で1 mM HClに可溶性です。

トリプシンは、アミノ酸残基223個の単鎖ポリペプチドから構成され、トリプシノーゲンからN末端ヘキサペプチドが除去される（Lys - lleペプチド結合において開裂する）ことにより生成されます。 アミノ酸の配列は、6つのジスルフィド架橋により架橋されています。 これは、天然型のトリプシン、β-トリプシンです。 β-トリプシンは自己分解することができ、Lys - Ser残基において開裂してα-トリプシンとなります。 トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーのメンバーです。

基質として1単位のBAEEを使用したとき、pH 7.6、25°CにおけるA₂₅₃は0.001/分となります。

1 mM HClを溶媒とする溶液は、一定分量に小分けした状態で-20°Cで保管すれば1年間安定です。Ca²⁺が存在すれば、トリプシンの自己分解も抑えられ、その溶液中での安定性が維持されます。 トリプシンは2.0 M尿素、2.0 MグアニジンHCl、または0.1% (w/v) SDS中でもその活性の大部分を保持します。