HPLC用緩衝液

緩衝液とは、弱酸とその共役塩基、あるいは弱塩基とその共役酸からなる溶液のことです。分析化学において、緩衝液は通常、試料に酸性または塩基性の官能基が含まれている場合、逆相高速液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)で使用されます。緩衝液は、水素イオン/ヒドロニウムイオンおよび水酸化物イオンの影響を緩和し、その結果、pHの変動を低減させます。
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移動相バッファー
イオン性分析物のRP-HPLC法開発において、緩衝種、イオン強度、およびpHの観点から適切な緩衝液を選択することは、最も重要なステップである。RP-HPLCにおけるイオン性分析物の保持は、基本的に移動相のpHによって左右される。したがって、RP-HPLCにおける移動相のpH制御は、分析物を効果的に分離するための最も重要なパラメータの一つである。
シリカ系カラムを用いた逆相分離における一般的なpH範囲は2~8です。緩衝液は、そのpKa付近でpHを最も効果的に制御できるため、目的のpHに近いpKaを持つものを選択する必要があります。経験則として、目的の移動相pHよりpKa値が2単位未満の緩衝液を選択するのが理想的です。当社は、お客様のあらゆる実験室用クロマトグラフィーのニーズに応えるため、幅広いpH範囲に対応したHPLCグレードの緩衝液を提供しています。
HPLC用緩衝液の選定時に考慮すべき要素
化学的純度
HPLC実験で使用される移動相添加剤(緩衝液、塩、酸、塩基)および有機溶媒の品質は、検出器の感度や溶出プロトコルに合わせて調整する必要があります。最適なクロマトグラフィーを行うためには、高品質な溶媒および試薬の使用が推奨されます。
化学的適合性
緩衝液の組成および移動相のpHは、カラムのハウジング材質および固定相の性質に合わせて選択する必要があります。これにより、カラムのハードウェアや充填剤への損傷を防ぐことができます。
緩衝液の溶解性
理想的には、緩衝液は水に完全に溶解し、沈殿を生じないものであるべきです。緩衝液を有機溶媒と混合する際、高濃度での沈殿を防ぐために、緩衝液の濃度は慎重に選択する必要があります。これを怠ると、ポンプの動作に問題が生じたり、HPLCカラムの閉塞を引き起こしたりする可能性があります。
緩衝液の強さ
固定相との相互作用が弱い溶離液は、カラムから結合の弱い分析物しか溶出させることができませんが、相互作用が強い場合は、強く結合した試料分子の溶出を引き起こします。各種溶媒の溶出力(溶媒強度)は、使用される固定相の種類によって異なります。溶出力に次いで、HPLC分析での使用適性という点では、緩衝液の粘度とUV吸光度が重要な役割を果たします。