細胞分散試薬

生体内の環境を再現するため、付着性細胞(上皮細胞など)は通常、組織培養処理が施された表面に播種され、そこで付着して生存・増殖します。増殖、計数、および下流の分析を行うには、付着性細胞や固形組織由来の細胞を解離させて懸濁液を作成する必要があります。細胞計数、継代のための再播種、および細胞アッセイ/分析には、単一細胞懸濁液が必要です。
解離試薬には、天然由来の酵素や、より穏やかな非酵素系の代替品が含まれます。これらの試薬は、カルシウムをキレート化することで、カドヘリンが表面や互いに結合するのを防ぎ、培養過程において細胞をこれらの表面から遊離させる働きをします。細胞培養のワークフローで使用される細胞解離試薬は、細胞外マトリックス(ECM)基質に特異的なものもあります。
Products

トリプシン、組換えトリプシン、StableCell™ トリプシン
トリプシンはセリンプロテアーゼの一種であり、付着性細胞株や組織の解離に用いられる最も一般的な剥離酵素の一つです。一般的に、粗製トリプシン製剤はこれらの用途の両方においてより効率的であることが知られていますが、高濃度のトリプシンで細胞をインキュベートしたり、インキュベーション時間を長くしすぎたりすると、細胞膜が損傷を受けたり、細胞が死滅したりするリスクがあります。 培養細胞は、通常、EDTA(エチレンジアミン四酢酸)と組み合わせたトリプシン処理によって培養基質から剥離されますが、この際のトリプシン濃度は0.025%から0.5%の範囲です。
StableCell™ トリプシン溶液は、標準的なトリプシン溶液と同様に細胞の剥離を行う一方で、トリプシンの分注、凍結、解凍を必要としないよう開発されました。これにより、細胞の継代や実験のためにトリプシンを分注し、解凍を待つ手間が省け、大幅な時間の節約につながるほか、実験室の冷凍庫の貴重なスペースを空けることができます。 当社のStableCell™ トリプシン溶液は2~8 °Cでの保存が推奨されていますが、当社の研究によると、StableCell™ トリプシンは37 °Cで保存した場合でも、90%以上の活性と性能を維持することが示されています。
コラゲナーゼとディスパゼ
コラゲナーゼは、天然の三重らせん構造を持つコラーゲンのペプチド結合を切断する。天然のコラーゲンを加水分解するこの独特な能力により、動物組織からの細胞分離に広く利用されている。コラゲナーゼは、さまざまな微生物や多くの動物細胞に存在する。最も強力なのは、嫌気性細菌であるClostridium histolyticumが分泌する「粗製」コラゲナーゼである。
ディスパゼは、培養中の無傷の上皮シートを基質から分離できる、迅速かつ効果的で、細胞に優しく、中性のプロテアーゼである。ディスパゼIは、肺組織の消化や、フローサイトメトリー用細胞の処理、さらにはマウスCD4 T細胞の単離に用いられてきた。
特殊培養用解離試薬
より穏やかな酵素活性が必要な細胞や組織の分離・剥離には、Accutase®およびAccumax™溶液が、低濃度で高効率な酵素を使用しています。これらの溶液は:
- 胚性幹細胞および神経幹細胞を効率的に剥離
- 細胞の生存率を維持するために穏やかに剥離し、細胞収量を向上させることができる
- 中和処理が不要
単一細胞解析
組織サンプルを扱う場合、単一細胞解析には生存可能な単一細胞の供給が必要です。これらの解析により、研究者は幹細胞、免疫学、およびがん研究において、細胞培養集団の変動を調査することができます。プロトコルの最適化、ベストプラクティスの確立、そして信頼性の高い単一細胞解析データの確保に不可欠な、当社の高品質な分離試薬をご覧ください。
関連リソース
- パンフレット:細胞の分散および溶解用酵素
細胞剥離および組織分散用の酵素、細胞溶解およびプロトプラスト調製用の酵素、ならびにミトコンドリア単離用のプロテアーゼを含む
- Trypsin Cell Dissociation Protocol
Trypsin is commonly used for dissociating adherent cells from surfaces. A wide variety of trypsin solutions are available to meet your specific cell line requirements.
- 組織分散ガイド:コラゲナーゼ、ディスパーゼ、およびリベラーゼ酵素種
コラゲナーゼガイド。動物組織を結合する天然コラーゲンを分解する酵素であるコラゲナーゼは、さまざまな微生物や多様な動物細胞によって作られます。
- StableCell™ Trypsin Solutions
StableCell™ Trypsin solutions are designed to perform cell detachment as standard trypsin solutions do, without the need to aliquot, freeze, and thaw. This saves significant time before passaging.
- Subculture of Adherent Cell Lines
Cell culture protocol for passaging and splitting adherent cell lines using trypsin EDTA. Free ECACC handbook download.
- Collagenase Blends for Gentle Tissue Dissociation
Discover pre-mixed collagenase enzyme blends with DNase I, Dispase II, Elastase, and Hyaluronidase and gently dissociate animal tissues in vitro.