ディスパーゼ^®II

Sigmaの酵素は、マウス胚乳腺芽のex vivo培養のためのプロトコルの作成に使用されています。これは、ラット心臓からミトコンドリアを単離するときのラット心臓片の処理に使用されています。また、酵素加水分解による歯髄幹細胞（DPSC）の単離にも使用されています。これらの細胞は、それらの幹細胞および分化特性を分析するために、移植法により単離されたDPSCと比較されています。
ディスパーゼ^®IIは、蛍光活性化細胞選別（FACS）用に使用されています。また、内臓卵黄嚢の分離にも用いられています。
シーケンシング用の単一細胞懸濁液の調製における使用に適しています。

ディスパーゼ^®IIは、非極性アミノ酸残基のN末端ペプチド結合を加水分解する中性プロテアーゼです。これは、in vitroで増殖した多くの組織および細胞を分離するために使用される場合があります。酵素反応は非常に穏やかで、細胞膜を傷つけません。これは、懸濁培養における凝集を防止するためにも使用できます。このプロテアーゼは、フィブロネクチンとIV型コラーゲンを切断しますが、ラミニン、V型コラーゲン、血清アルブミンやトランスフェリンは切断しません。ディスパーゼ^®IIは、ロイシン-フェニルアラニン結合を特異的に切断します。Ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺、Fe³⁺およびAl³⁺は酵素を活性化させます。EDTA、EGTA、Hg²⁺および他の重金属は、酵素活性を阻害します。本酵素は、精製酵素1 g-モルあたり亜鉛1 g-原子を含有しています。この亜鉛成分がEDTAまたはEGTAのようなキレート剤により除去されると、不活性のアポ酵素が得られます。酵素は血清により阻害されません。

凍結乾燥品(酢酸カルシウムと乳糖を含有)

50 U/mLの保存溶液は、10 mMのNaAc（pH 7.5）および5 mMのCaAcを含有する緩衝液に粉末を溶解することにより調製できます。これは、4℃で保存する必要があります。

本酵素は、最初に50 mM Hepes/KOH（pH 7.4）、150 mM NaClに10 mg/mLで溶解させることができます。 解離する細胞に最も適した細胞培養培地でさらに希釈する必要があります。 ディスパーゼはメタロプロテイナーゼであり、Ca2⁺、Mg2⁺、Mn2⁺およびFe2⁺などの二価カチオンにより活性化されます。

1ユニットは、特記しない限り、pH 7.5、37°C、1分間で、カゼインを加水分解し、1.0 μmol(181 μg)のチロシンに相当する呈色を生ずる酵素量です(Folin-Ciocalteu試薬で発色)。

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.