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NGSライブラリ調製

NGSライブラリ作製

ライブラリ調製は、次世代シーケンシングの最初のステップです。DNAまたはRNAサンプルをシーケンシングするには、まず核酸を単離し、断片化し、末端修復を行い、ライゲーション法またはタグメンテーション法を用いてアダプターと共有結合で結合させる必要があります。 適切に調製されたNGSライブラリの複雑度は、サンプルの複雑度を完全かつ正確に反映しているべきですが、ライブラリ調製中に生じたバイアスも反映することになります。 次世代シーケンシング用のDNAまたはRNAライブラリを調製する際の重要な目標は、複雑性を最大化しつつ、PCRやその他の増幅によって生じるバイアスを低減することです。これは、得られたライブラリの品質がNGSの結果に大きな影響を与えるためです。

当社は、ワークフローを簡素化し、サンプルの複雑性を正確に反映しつつバイアスを低減した高品質なDNAまたはRNAライブラリの調製を容易にする、NGSライブラリ調製ツールのポートフォリオを提供しています。これらは、全ゲノムシーケンシング(WGS)、全トランスクリプトーム解析(WTA)、総RNAシーケンシング、およびmiRNAおよびスモールRNAシーケンシングの各用途に対応しています。


Products






ゲノムDNA抽出キット

DNAライブラリの作製には、細胞、組織、またはその他の試料から高分子量ゲノムDNA(gDNA)を抽出する必要があります。精製されたゲノムDNAは、その後の増幅反応やシーケンシング反応において最適な性能を発揮できるよう、断片化が最小限であり、生物学的および化学的汚染物質が極力少ないものであることが求められます。  

Fire Monkey™/Fire Flower™ 高分子量DNA抽出キットを使用することで、切断が最小限に抑えられ、低分子量核酸汚染物質の少ない高純度のゲノムDNAを単離することができます。

  • Fire Monkey™は、標準的なスピンカラム法を採用しており、細菌細胞または哺乳類細胞から、平均鎖長100kb以上の高分子量DNAを1時間で抽出します。
  • Fire Flower™は、標準的なスピンカラム法を採用しており、あらゆるサンプル源から抽出したDNAを15分以内にサイズ選別することができます。Fire Flower™は、30kbまでのDNA断片を除去しながら、全体的な平均鎖長を30%増加させることができます。 

全ゲノム増幅キット

DNA配列解析は、利用可能なサンプル量が少ないことや抽出収率が低いことによって制限されることがよくあります。入手可能な出発物質が限られている場合、増幅技術を用いて出発DNAの量を増やすことができます。全ゲノム増幅(WGA)は、NGSワークフローへの投入に向け、無傷のDNAサンプルおよび高度に断片化されたDNAサンプルの両方を事前増幅するために使用できます。

SeqPlex-I WGAキットを使用すると、少量のDNAや、劣化・高度に断片化したDNAを増幅し、Illumina®次世代シーケンシング(NGS)フローセルに直接投入することが可能です。  

  • わずか100 pgのDNAからのシーケンシングを可能にします
  • ゲノム全体を網羅し、シーケンスバイアスを最小限に抑え、次世代シーケンシング(NGS)に最適な増幅産物サイズを実現する、改良型プライマー
  • コスト効率に優れています:追加のNGSライブラリ調製ステップが不要
  • Illumina®次世代シーケンシングに対応

全ゲノム増幅用のSeqPlex Enhanced DNA Amplification Kitは、極めて微量のDNAや、分解・高度に断片化されたDNAからの次世代シーケンシングを容易にするように設計されています。本キットは、Illumina®、SOLiD™、または454シーケンシングのワークフローに統合できるよう開発されました。

  • ランダムプライミング技術により、ChIPやFFPEなどの断片化したDNAを増幅
  • わずか100 pgのChIP DNAからのシーケンシングを可能にします
  • 全ゲノムを網羅し、シーケンスバイアスを最小限に抑え、プライマー除去を可能にする強化プライマー
  • 次世代シーケンシング向けのIllumina®、SOLiD™、または454ライブラリ調製法に対応

全トランスクリプトーム増幅キット

RNA-Seq用のNGSライブラリ調製における主な目的は、バイアスを低減しつつ、出発原料の配列プールを完全に反映できるよう、トランスクリプトームライブラリの複雑性を最大化することです。ハイスループットな遺伝子発現プロファイリングやトランスクリプトーム解析のためのRNA-Seqでは、出発原料となるRNAの量が少ないことが一般的な課題となっています。 全トランスクリプトーム増幅(WTA)を利用すれば、少量のRNAから十分な量のシーケンシングターゲットを生成できますが、ライブラリのバイアスを低減するためには、特定のmRNAを損失や歪みなく高忠実度で複製する必要があります。

SeqPlex-I WTAキットを使用すると、少量の逆転写RNAや分解されたRNAを増幅し、Illumina®次世代シーケンシング(NGS)フローセルに直接投入することが可能です。 

  • 断片化された、あるいは極めて少量のトータルRNAを増幅します。FFPEやRIPを含むあらゆる由来の断片化RNAや無傷のRNAも、ランダムプライミング技術を用いて容易に増幅できます。
  • セミデジェネレートライブラリプライマーの設計により、トランスクリプトームのより完全なカバレッジと効率的なプライミングが保証されます。
  • 工程の簡略化:シーケンシング前にcDNAを断片化する必要がありません。
  • 高効率:8時間以内でds-cDNAを増幅
  • コスト効率に優れる:追加のNGSライブラリ調製工程が不要
  • Illumina®次世代シーケンシングに対応

全トランスクリプトーム増幅(WTA)用の SeqPlex RNA 増幅キットは、微量の RNA や、分解・高度に断片化された RNA(例えば、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織サンプル由来の RNA)からの次世代シーケンシング(NGS)を容易にするように設計されています。 SeqPlex キットを使用すると、ユーザーは NGS ワークフローに投入するための RNA サンプルを事前増幅することができます。

  • ランダムプライミング技術により、FFPEやRIPを含むあらゆる由来の、断片化されたRNAや無傷のRNAを、少量であっても増幅することができます。
  • 半縮退ライブラリプライマーを設計することで、トランスクリプトームのより完全なカバレッジと効率的なプライミングを実現します。
  • シーケンシングの前に DNA を断片化する必要はありません。
  • 8 時間以内で ds-cDNA を増幅します。
  • Pacific Bioscience を除く、すべての次世代シーケンシングプラットフォームに対応しています。

関連リソース

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