Preparación de medios de cultivo microbianos

Tipos de medios de cultivo

Los medios de cultivo microbiano deben proporcionar condiciones óptimas de crecimiento para todos los tipos de microorganismos o para tipos específicos. La composición precisa de un medio depende de la especie que se cultiva y del objetivo de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en función de los microorganismos. Los medios de cultivo microbiano se clasifican en función de varios parámetros, como los componentes químicos, la naturaleza física y la función. A continuación se describen los tipos de medios definidos por estos parámetros.

Clasificación de los medios de cultivo microbiano según su composición química

El medio sintético (definido) es un medio con una composición química definida que se utiliza habitualmente para cultivar fotoautótrofos, como cianobacterias y protistas fotosintéticos. Se utiliza ampliamente en la investigación para estudiar el metabolismo de los microorganismos.

Los medios complejos son medios que contienen componentes químicos no definidos, como peptona, extracto de carne y extracto de levadura, que satisfacen las necesidades nutricionales de diferentes microorganismos. Se utilizan para cultivar microbios exigentes con necesidades nutricionales complejas.

Medios de cultivo microbiano según su naturaleza física

El medio sólido utiliza entre un 1 % y un 7 % de agar-agar o entre un 10 % y un 20 % de gelatina para solidificar el caldo líquido. Los medios sólidos se utilizan para aislar diferentes microbios entre sí, establecer cultivos puros, hacer agar inclinado y hacer agar en bastoncillo.

El medio líquido no contiene ningún agente solidificante. Tras la inoculación y la incubación, las células se hacen visibles en forma de una pequeña masa o un caldo turbio.

Medios de cultivo microbiano basados en el método de preparación

El medio listo para usar es un medio sólido o líquido que se suministra en placas, botellas, tubos u otros recipientes, en forma lista para usar o lista para usar después de volver a fundirla y añadirle suplementos.

El medio preparado a partir de formulaciones deshidratadas comercialmente es un medio en forma seca que requiere rehidratación y procesamiento antes de su uso, lo que da como resultado un medio completo o un medio incompleto al que se le añaden suplementos antes de su uso.

El medio preparado a partir de componentes individuales esun medio producido por un laboratorio de microbiología a partir de sus ingredientes individuales.

El medio bajo demanda se produce mediante un sistema que mantiene un medio de cultivo estéril y altamente concentrado disponible en un laboratorio durante varios días. Mediante la dilución con agua estéril, puede producir la cantidad necesaria de medio listo para su uso bajo demanda, sin necesidad de esterilización en autoclave.

Preparación de medios de cultivo microbianos

La preparación de medios a partir de formulaciones comerciales deshidratadas debe realizarse siguiendo las instrucciones del fabricante. La formulación de los ingredientes básicos, como peptonas, extractos de levadura, agar, sustancias tampón y antibióticos, se modifica para lograr la consistencia del medio. La cantidad necesaria de medio deshidratado o de ingredientes individuales se disuelve en agua destilada mediante agitación continua seguida de calentamiento (si es necesario). Los medios que contienen agar deben remojarse adecuadamente con la agitación adecuada antes de calentarlos. Se debe ajustar el pH y el medio se dispensa en recipientes adecuados para su esterilización por calor húmedo en un autoclave. Las sustancias sensibles al calor (por ejemplo, proteínas, enzimas) se esterilizan utilizando filtros de membrana.

Los medios de cultivo deben almacenarse a temperaturas específicas para evitar la modificación de la composición, y no más allá de la vida útil del producto. La preparación y el almacenamiento asépticos son esenciales para proteger los medios de cultivo de la infección microbiana. La pérdida de agua durante el almacenamiento puede minimizarse mediante un envoltorio impermeable y/o el almacenamiento a 5 °C ± 3 °C. La degradación química, por ejemplo, la oxidación o la pérdida de antimicrobianos, puede retrasarse protegiéndolos de la luz, el calor y la deshidratación.