Preparación de medios de cultivo microbianos

Tipos de medios de cultivo

Los medios de cultivo microbianos deben proporcionar condiciones óptimas de crecimiento para todos los tipos de microorganismos o para tipos específicos. La composición precisa de un medio depende de la especie cultivada y del objetivo de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en función de los microorganismos. Los medios de cultivo microbiano se clasifican en función de varios parámetros, como los componentes químicos, la naturaleza física y la función. Los tipos de medios definidos por estos parámetros se describen a continuación.

Clasificación de los medios de cultivo microbiano según su composición química

Medio sintético (definido) es un medio con componentes químicos definidos que se utiliza habitualmente para cultivar fotoautótrofos, como cianobacterias y protistas fotosintéticos. Se utiliza ampliamente en investigación, para estudiar el metabolismo de los microorganismos.

Medio complejo es un medio que contiene componentes químicos no definidos, como peptona, extracto de carne y extracto de levadura, que satisfacen las necesidades nutricionales de diferentes microorganismos. Se utiliza para cultivar microbios exigentes con requisitos nutricionales complejos.

Medios de cultivo microbianos basados en la naturaleza física

Medios sólidos utilizan 1-7% de agar-agar o 10-20% de gelatina para solidificar el caldo líquido. Los medios sólidos se utilizan para aislar diferentes microbios entre sí, establecer cultivos puros, hacer agar slants y hacer agar stabs.

Medio líquido no contiene ningún agente solidificante. Después de la inoculación e incubación, las células se hacen visibles en forma de una pequeña masa o caldo borroso.

Medios de cultivo microbianos basados en el método de preparación

Medio listo para usar es un medio sólido o líquido suministrado en placas, botellas, tubos u otros recipientes, en forma lista para usar o lista para usar después de refundir y suplementar.

Medio preparado a partir de formulaciones deshidratadas comercialmente es un medio en forma seca que requiere rehidratación y procesamiento antes de su uso, dando como resultado un medio completo o un medio incompleto al que se añaden suplementos antes de su uso.

Medio preparado a partir de componentes individualeses un medio producido por un laboratorio de microbiología enteramente a partir de sus ingredientes individuales.

Medio a demanda es producido por un sistema que mantiene disponible en un laboratorio un medio de cultivo estéril altamente concentrado durante varios días. Mediante dilución con agua estéril puede producir una cantidad requerida de medio listo para usar a demanda, sin necesidad de autoclave.

Preparación de medios de cultivo microbianos

La preparación de medios a partir de formulaciones comerciales deshidratadas debe realizarse siguiendo las instrucciones del fabricante. La formulación de los ingredientes básicos, como peptonas, extractos de levadura, agar, sustancias tampón y antibióticos, se modifica para conseguir la consistencia del medio. La cantidad necesaria de medio deshidratado o de ingredientes individuales se disuelve en agua destilada mediante agitación continua seguida de calentamiento (si es necesario). Los medios que contienen agar deben empaparse adecuadamente con agitación adecuada antes de calentarlos. Debe ajustarse el pH, y el medio se dispensa en recipientes apropiados para su esterilización por calor húmedo en autoclave. Las sustancias sensibles al calor (por ejemplo, proteínas, enzimas) se esterilizan utilizando filtros de membrana.

Los medios de cultivo deben almacenarse a temperaturas especificadas para evitar la modificación de la composición, y no más allá de la vida útil del producto. La preparación y el almacenamiento asépticos son esenciales para proteger los medios de cultivo de infecciones microbianas. La pérdida de agua durante el almacenamiento puede minimizarse mediante un envoltorio impermeable y/o un almacenamiento a 5 °C ± 3 °C. La degradación química, por ejemplo la oxidación o la pérdida de antimicrobianos, puede retrasarse protegiéndolos de la luz, el calor y la deshidratación.