ChIPAb+ RNA Pol II - Conjunto de cebador y anticuerpo validado por CHIP

210-220 kDa

La ARN polimerasa dependiente del ADN cataliza la transcripción del ADN en ARN utilizando los cuatro trifosfatos de ribonucleósido como sustratos. El componente catalítico más grande de la ARN polimerasa II que sintetiza los precursores de ARNm y muchos ARN funcionales no codificantes. Forma el centro activo de la polimerasa junto con la segunda subunidad más grande. La pol II es el componente central de la maquinaria de transcripción de la ARN polimerasa II basal. Se compone de elementos móviles que se mueven entre sí. La subunidad B1 de la ARN polimerasa II (RPB1) forma parte del elemento central con la hendidura central grande, el elemento de sujeción que se mueve para abrir y cerrar la hendidura y las mandíbulas que se cree que agarran la plantilla de ADN entrante. Al inicio de la transcripción, una cadena de ADN monocatenario del promotor que actúa de plantilla se coloca dentro de la hendidura del sitio activo central de la Pol II Una hélice puente emana de RPB1 y cruza la hendidura cerca del sitio catalítico y se cree que promueve la translocación de la Pol II actuando como una carraca que mueve el híbrido ARN-ADN a través del sitio activo al cambiar de las conformaciones recta a la doblada en cada paso de la adición de nucleótidos. Durante el alargamiento de la transcripción, la Pol II se desplaza sobre en la plantilla a medida que el transcrito se alarga. La elongación está influida por el estado de fosforilación del dominio C-terminal (CTD) de la subunidad más grande de la Pol II (RPB1), que actúa como una plataforma para el ensamblaje de los factores que regulan el inicio de la transcripción, la elongación, la terminación y el procesamiento de los ARNm. Actúa como ARN polimerasa dependiente de ARN cuando se asocia con el antígeno delta pequeño del virus de la hepatitis delta, actuando tanto como una réplica y una transcriptasa para el genoma ARN circular del virus

Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para la precipitación de cromatina, en cada lote y en todo momento. Cada conjunto anticuerpo ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en su contexto de cromatina. Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP.
El conjunto ChIPAb+ ARN Pol II incluye el anticuerpo ARN Pol II, el anticuerpo de control negativo (IgG de ratón) y cebadores qPCR que flanquean el promotor de la GAPDH humana, rindiendo un producto de 166 pb. Los anticuerpos ARN Pol II y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la ARN Pol II.

El anticuerpo RNA Pol II se elabora contra un péptido que corresponde al dominio C-terminal de la ARN Pol II

Análisis mediante Western Blot:
el extracto nuclear de 3T3 se resolvió por electroforesis, se transfirió a nitrocelulosa y se probó con anti-ARN polimerasa II (0,1 μg/ml). Las proteínas se visualizaron utilizando una anticuerpo secundario de cabra anti-ratón conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia (Véanse las figuras).

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

Conjunto de anticuerpo y cebador validados para ChIP de la ARN Pol II que incluye el anticuerpo de calidad para ChIP y cebadores de PCR de control específicos. En anticuerpo ChIP se utiliza para la inmunoprecipitación de cromatina de la ARN Pol II .

Subcategoría de investigación
Biología de la cromatina

Otras especies que se prevé que mostraran reacción cruzada basándose en la conservación de la secuencia son la rata y la levadura.

Reconoce la ARN Pol II

25 ensayos por juego. ~1 μg para inmunoprecipitación de cromatina

Anti-ARN Pol II ( IgG1 monoclonal de ratón, purificada). Un vial que contiene 25 μg de anticuerpo purificado en un volumen de 25 μl. Conservar a -20°C.

IgG normal de conejo. Un vial que contiene 25 µg de IgG de ratón en un volumen de 25 μl. Conservar a -20°C.

Cebadores de control p21. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para una región del promotor de la GAPDH humana. Conservar a -20°C.
DIR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
INV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG
CGA

Presentación: Purificada

Proteína G purificada

Estable durante 1 año a -20°C desde la fecha de recepción.

Control
Incluidos las IgG de ratón anticuerpos de control negativo y cebadores de control específicos para la GAPDH humana.

Evaluada habitualmente por inmunoprecipitación de cromatina en extracto nuclear HeLa.

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