Kit de proliferación celular (MTT)

El kit de proliferación celular I (MTT) es una valoración colorimétrica para la cuantificación no radiactiva de la proliferación, la viabilidad y la citotoxicidad celulares. El material de muestra consiste en células adherentes o en suspensión cultivadas en microplacas de 96 pocillos.

En las valoraciones colorimétricas se analiza el número de células viables por la escisión de las sales de tetrazolio añadidas al medio de cultivo. Esta técnica no requiere ni lavado ni recolección de las células, y el ensayo completo, desde el microcultivo hasta el análisis de los datos en un lector ELISA, se realiza en la misma microplaca.
MTT fue la primera sal de tetrazolio descrita. Es hidrolizada a formazán por enzimas del retículo endoplasmático. Esta biorreducción se produce sólo en células viables, y está relacionada con la producción de NAD(P)H a través de la glucólisis. Por consiguiente, la cantidad del colorante formazán formado muestra una correlación directa con el número de células metabólicamente activas en el cultivo.

Valoración colorimétrica (basada en MTT) para la cuantificación no radiactiva de la proliferación, la viabilidad y la citotoxicidad celulares.

El kit de proliferación celular I (MTT) se utiliza para la cuantificación espectrofotométrica no radiactiva de la proliferación y la viabilidad celulares en poblaciones celulares utilizando el formato de placas de 96 pocillos. Puede utilizarse para:

• Medida de la proliferación celular en respuesta a factores de crecimiento, citocinas, mitógenos y nutrientes.
• Análisis de compuestos citotóxicos y citostáticos, como los medicamentos antineoplásicos y otros compuestos farmacéuticos
• Evaluación de los anticuerpos inhibidores del crecimiento y mediadores fisiológicos
• Análisis de la biocompatibilidad de varios armazones empleados en el diseño genético de tejido óseo, para el crecimiento de células óseas.

El ensayo se basa en la rotura de la sal de tetrazolio MTT en presencia de un reactivo de acoplamiento electrónico. La sal formazán insoluble en agua producida debe solubilizarse en una etapa añadida. Las células cultivadas en placas de cultivo tisular de 96 pocillos se incuban con la disolución MTT durante aproximadamente 4 horas. Después de este periodo de incubación, aparece un colorante formazán insoluble en agua. Después de la solubilización, se cuantifica el colorante formazán utilizando un espectrofotómetro de barrido múltiple (lector de ELISA). La absorbancia medida se relaciona directamente con el número de células viables.
Los ensayos de proliferación y viabilidad celulares son de particular importancia en las aplicaciones ordinarias de biología celular. Las sales de tetrazolio (MTT, XTT, WST-1) son particularmente útiles para este tipo de análisis. Las sales de tetrazolio son escindidas para dar formazán por medio del sistema de la succinato-tetrazolio reductasa (EC 1.3.99.1), que pertenece a la cadena respiratoria de las mitocondrias, y está activo sólo en las células metabólicamente intactas.

1 kit que contiene 2 componentes.

Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): de 2 a 8 °C
Después de descongelarlos, los reactivos de marcaje MTT pueden conservarse protegidos de la luz a una temperatura comprendida entre 2 y 8 °C durante un máximo de 4 semanas, en cuyo caso se recomienda la filtración del reactivo a través de una membrana de 0,2 μm de tamaño de poro.