Oxidasa de colina from Alcaligenes sp.

La colina oxidasa del género Alcaligenes se ha utilizado:

• en un estudio para investigar un biosensor de colina construido con una membrana quitinosa y su aplicación en la medición de las actividades inhibidoras de la colinesterasa
• también se ha utilizado en estudios espectroscópicos sobre la fotorreacción de la colina oxidasa con flavina unida covalentemente.
• como componente de la disolución salina tamponada con fosfato (PBS) para la medición de la actividad colina acetiltransferasa (ChAT) en homogeneizados de tejido cerebral
• para medir la colina generada por la autotaxina (ATX) en el ensayo de actividad de la ATX y la fosfolipasa-D (PLD) en el ensayo de actividad de la PLD

La colina oxidasa cataliza la oxidación de la colina en glicina-betaína mediante la transferencia de cuatro electrones, con la aldehído de betaína como intermediario y el oxígeno molecular como el aceptor de electrones principal. La enzima también puede aceptar a la betaína-aldehído como sustrato. Esto permite el estudio del mecanismo de reacción para la conversión de la colina en el intermediario aldehído y de la betaína-aldehído a la glicina-betaína. La enzima es una flavoproteína con un peso molecular aproximado de 72.000 Da (filtración en gel) o 62.000 Da (electroforesis en gel de SDS).

Punto isoeléctrico:4,1 ± 0,1
Constantes de Michaelis:2,84 x 10¯³M (colina), 5,33 x 10¯³M (aldehído de betaína)
Estructura:Un mol de FAD se une covalentemente a un mol de la enzima
Inhibidores:p-Cloromercuribenzoato, Cu⁺⁺, Co⁺⁺, Hg⁺⁺, Ag⁺
pH óptimo:8,0 - 8,5
Temperatura óptima:40 – 45°C
Estabilidad de pH:pH 7,0 – 9,0 (30°C, 2 horas)
Estabilidad térmica:Por debajo de 37°C (pH 7,5, 10 min)

Una unidad formará 1 μmol de H₂O₂ con oxidación de 1 μmol de colina a aldehído de betaína por min a pH 8,0 y 37 °C. Nota: Durante la conversión de colina en betaína por la colina oxidasa, se producen 2 μmoles de H₂O₂ por cada μmol de colina.