Desoxirribonucleasa I from bovine pancreas

La ADNasa I se utiliza para cortar el ADN como primer paso para incorporar las bases marcadas en el ADN. La ADNasa I de Sigma se ha utilizado junto con otras enzimas para recolección y disociación tumorales, durante el aislamiento y la caracterización molecular de las células madre cancerosas en tumores de mama MMTV-Wnt-1 de ratón.

La desoxirribonucleasa I de páncreas bovino se ha utilizado en un estudio para determinar que las desoxirribonucleasas I de mamífero se clasifican en tres tipos en función de las diferencias en sus concentraciones tisulares. La desoxirribonucleasa I del páncreas bovino se ha utilizado también en un estudio para comparar las tres estructuras primarias de las desoxirribonucleasas aisladas de los páncreas bovino, ovino y porcino.

Utilizado para eliminación del ADN de las muestras proteicas.

La ADNasa I es una endonucleasa que actúa sobre los enlaces fosfodiéster adyacentes a pirimidinas para producir polinucleótidos con 5′-fosfatos terminales. En presencia de Mg²⁺, la ADNasa I escinde cada hebra de ADN independientemente y los sitios de rotura son aleatorios. Las dos hebras de ADN se rompen aproximadamente en el mismo sitio en presencia de Mn²⁺. Se observó que el pH óptimo se encontraba entre 7 y 8. Cationes divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, y Zn²⁺ son activadores de la enzima. Una concentración de Ca²⁺ 5 mM estabiliza la enzima contra la digestión proteolítica. La ADNasa I de páncreas bovino consta de cuatro componentes distinguibles mediante cromatografía, el A, el B, el C y el D, en proporciones molares de 4:1:1, respectivamente. Sólo se encuentran cantidades menores del componente D. Se sabe que el 2-mercaptoetanol, los quelantes, el dodecilsulfatosódico (SDS) y la actina inhiben la actividad de la enzima.

Eliminación eficiente del ADN: La desoxirribonucleasa I del páncreas bovino es una endonucleasa eficaz que escinde de forma aleatoria las dos hebras del ADN, por lo que es una opción fiable para la eliminación del ADN de las muestras de proteínas.

Aplicaciones versátiles: Esta enzima se puede utilizar para cortar el ADN, incorporar bases marcadas en el ADN y aislar y caracterizar molecularmente las células madre cancerosas en los tumores de mama murinos. También es útil en estudios comparativos de desoxiribonucleasas aisladas del páncreas bovino, ovino y porcino.

Estable: La enzima permanece activa hasta cinco horas a 60 °C entre pH 5 y 7, y puede conservarse hasta una semana a −20 °C con una pérdida mínima de actividad. Esta estabilidad la convierte en una opción práctica y rentable.

El polvo de enzima puede reconstituirse en agua o en cualquier tampón a pH 4,0 - 9,0, excepto el tampón fosfato. Los quelantes de calcio deben evitarse. Una disolución de 10 mg/ml de ADNasa I en NaCl 0,15 M pierde un <10% de su actividad cuando se almacena durante una semana en alícuotas a −20 °C. Las mismas disoluciones conservadas en alícuotas a 2-8 °C pueden perder aproximadamente un 20 % de actividad. Permanece activa durante un máximo de cinco horas a 60 °C a un pH comprendido entre 5 y 7, y pierde actividad en <10 minutos a 68 °C. Pierde actividad a un ritmo de un 6%/hora en tampón acetato (pH 5,0) y tampón tris (pH 7,2) a una concentración de 1 mg/ml.

Proteína determinada por Biuret.

Una unidad Kunitz producirá una ΔA₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml a pH 5,0 y 25 °C, utilizando como sustrato ADN de tipo I o III.