Purification des échantillons

Graphique illustrant les principales étapes de la séparation par chromatographie d'affinité, comprenant les phases de liaison, de lavage et d'élution.

Diverses méthodes de purification chimiques et physiques peuvent être utilisées pour séparer ou concentrer un analyte cible avant l'analyse. Parmi celles-ci figurent l'absorption, l'adsorption, la chromatographie, la distillation, l'extraction, l'échange d'ions, la filtration, la formation de complexes, la cristallisation, le séchage, et bien d'autres encore. La préparation de l'échantillon avant l'analyse permet de le mettre dans un format compatible avec la technique d'analyse, de réduire sa complexité, d'éliminer les impuretés gênantes et de concentrer l'analyte avant l'analyse. Une préparation appropriée de l'échantillon évitera le colmatage, pourra réduire la nécessité de procédures de lavage rigoureuses et pourra prolonger la durée de vie du support chromatographique.

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Gros plan sur un appareil Amicon utilisé pour la filtration, composé de quatre tubes transparents disposés verticalement dans un cadre noir. Les tubes contiennent des liquides de différentes couleurs, indiquant des concentrations ou des solutions variées. L'appareil est posé sur un plan de travail de laboratoire ; on aperçoit des tuyaux raccordés à sa partie supérieure et une base qui semble conçue pour assurer sa stabilité pendant son fonctionnement.

Dispositifs Amicon^®

Dispositifs d'ultrafiltration centrifuge et sous pression destinés à la concentration de protéines, au dessalement, à l'échange de tampons, à la séparation et à la diafiltration d'échantillons biologiques et environnementaux en vue d'applications en aval.

Produits de la boutique

Système de purification d'eau ultra-pure et pure Milli-Q® IQ 7003/05/10/15 - Système de purification d'eau de laboratoire de type 1 et de type 2, comprenant des unités de production et de stockage ainsi que des distributeurs d'eau pure et ultra-pure.

Systèmes de purification d'eau de laboratoire de paillasse Milli-Q^®

Les systèmes Milli-Q^® proposent des technologies innovantes de purification de l'eau conçues pour...

Produits de la boutique

Un bécher de laboratoire transparent rempli d'un liquide incolore, contenant un petit récipient cylindrique rempli d'un liquide rouge. Le récipient est surmonté d'un couvercle bleu qui flotte à la surface du liquide dans le bécher. Le bécher comporte des graduations sur le côté, indiquant son volume.

Appareils de dialyse et de diafiltration de laboratoire

Dialyseurs, dispositifs d'ultrafiltration centrifuge et cuves agitées pour l'échange de tampon...

Produits de la boutique

Dispositif de filtration de laboratoire composé d'une base blanche et de cinq tubes transparents disposés verticalement dans la partie supérieure. Les tubes sont remplis de liquide et comportent des repères verts. À l'avant du dispositif, on aperçoit un manomètre indiquant la pression du système. L'arrière-plan est d'un jaune vif, ce qui améliore la visibilité de l'équipement.

Extraction en phase solide (SPE) et QuEChERS

Découvrez notre gamme de produits d'extraction en phase solide pour des analyses rapides et précises...

Produits de la boutique

Certaines des techniques de purification les plus courantes présentées ci-dessous sont utilisées en laboratoire pour préparer les échantillons en vue d'analyses ultérieures.

Dialyse

La dialyse est une technique de purification utilisée pour éliminer le sel ou d'autres molécules de faible poids moléculaire d'un échantillon. Elle sert également à modifier la composition du tampon d'un échantillon. La dialyse est une technique passive qui nécessite de grands volumes de tampon.

Échange de tampon et dessalement

Le dessalement est une méthode simple permettant d'éliminer les sels et autres contaminants de faible poids moléculaire d'un échantillon. Il est également utilisé pour l'échange de tampon avant ou après différentes étapes chromatographiques et pour l'élimination rapide des réactifs afin de mettre fin à une réaction.

Précipitation fractionnée

La précipitation fractionnée est utilisée pour éliminer les impuretés grossières de petits volumes d'échantillon. Les techniques de précipitation séparent les fractions selon le principe de la solubilité différentielle. Comme les espèces protéiques diffèrent par leur degré d'hydrophobicité, une augmentation des concentrations en sel peut renforcer les interactions hydrophobes entre les protéines et provoquer une précipitation.

Extraction

La préparation d'échantillons par extraction consiste à isoler les analytes cibles d'un échantillon complexe ou d'un volume d'échantillon beaucoup plus important. Ce processus élimine les composants de l'échantillon susceptibles d'interférer et de bloquer les colonnes HPLC et GC. Il augmente également la concentration de l'analyte d'un facteur de 100 à 5 000, améliorant ainsi considérablement la sensibilité de détection. Dans le cadre d'une préparation d'échantillon sélective et spécifique, l'extraction contribue à garantir une analyse chromatographique plus fiable. Les types d'extraction sont l'extraction liquide-liquide, l'extraction en phase solide (SPE) et la micro-extraction en phase solide (SPME).

Chromatographie d'affinité

La chromatographie d'affinité sépare les protéines sur la base d'interactions réversibles entre une protéine et un ligand spécifique qui a été couplé à une matrice chromatographique. Cette technique est hautement sélective et permet une purification des protéines à grande capacité. La chromatographie d'affinité peut être utilisée dès lors qu'un ligand approprié est disponible pour la protéine d'intérêt.

La purification par chromatographie d'affinité comprend des étapes de capture et d'élution. Lors de la phase de capture, la protéine cible est liée de manière spécifique et réversible à un ligand complémentaire immobilisé sur une matrice chromatographique. L'objectif est d'isoler, de concentrer et de stabiliser le produit cible, tout en préservant son activité et son efficacité. Après lavage de la matrice pour éliminer les substances non liées, la protéine cible liée est récupérée en modifiant les conditions pour favoriser l'élution. L'élution est réalisée de manière spécifique, à l'aide d'un ligand compétitif, ou de manière non spécifique, en modifiant le pH, la force ionique ou la polarité. L'élution permet de recueillir la protéine cible sous une forme purifiée et concentrée.