Anticorps anti-phospho-Akt (Ser473), clone 6F5

60 kDa

L'Akt/PKB est une Ser/Thr kinase et constitue l'un des principaux effecteurs connus de la voie de signalisation de la PI3-kinase. Elle est impliquée dans de multiples voies de signalisation qui interviennent dans de nombreux processus biologiques, notamment le métabolisme du glucose, la survie cellulaire/l'apoptose, le contrôle du cycle cellulaire, l'angiogenèse, la différenciation, ainsi que la croissance et la prolifération cellulaires. Chez les mammifères, il existe trois isoformes d'Akt (Akt1/PKBα, Akt2/PKBβ et Akt3/PKBγ). Ces dernières présentent un degré élevé d'homologie, mais diffèrent légèrement au niveau de la localisation de leurs sites de phosphorylation régulateurs. L'Akt1 est l'isoforme prédominante dans la plupart des tissus ; elle jouerait un rôle prépondérant dans la croissance, la survie, le développement embryonnaire et la différenciation des adipocytes. Une corrélation existe entre l'Akt2 et la régulation de l'homéostasie du glucose. De plus, l'Akt2 est l'isoforme prédominante exprimée dans les tissus sensibles à l'insuline. L'Akt3 est présente en abondance dans les tissus cérébraux. Chaque isoforme d'Akt est composée de trois régions fonctionnellement distinctes : un domaine d'homologie de Pleckstrin (PH) N-terminal qui fournit un module de liaison aux lipides pour diriger l'Akt vers la PIP3 au niveau de la membrane cellulaire (nécessaire à son activation), un domaine catalytique central contenant le résidu Thr308 et un motif hydrophobe C-terminal contenant le résidu Ser473. L'activation de l'Akt repose sur un double mécanisme de régulation qui nécessite à la fois une translocation vers la membrane plasmique ainsi qu'une double phosphorylation au niveau des résidus Thr308 et Ser473 par la PDK1 et le complexe TORC2, respectivement.

Peptide englobant et incluant le résidu Ser473 phosphorylé de l'Akt1 humaine.

Analyse par immunofluorescence :
Les cellules A431 traitées à l'EGF ont été fixées, perméabilisées et colorées à l'aide de l'anticorps anti-phospho-Akt (Ser473), clone 6F5 (2 µg/ml) (rouge). L'anticorps anti-souris conjugué au colorant cy3 a été utilisé pour la détection et de la phalloïdine AlexaFluor 488 (verte) a été utilisée pour colorer l'actine.

Immunohistochimie :
une dilution au 1/200e a été utilisée pour l'anticorps antiphospho-Akt (Ser473), clone 6F5, à l'aide d'un test de détection IHC-Select avec HRP-DAB.

Cytométrie en flux :
l'anticorps anti-phospho-Akt (Ser473) a été utilisé à une dilution au 1/800e pour ce dosage.

L'anticorps anti-phospho-Akt (Ser473), clone 6F5, détecte la présence de la protéine phospho-Akt (Ser473) ; son utilisation a fait l'objet de publications et a été validée en ELISA, WB, FC, IF et IH.

Reconnaît l'Akt uniquement lorsque celle-ci est phosphorylée au niveau du résidu Ser473. Cet anticorps ne présente aucune réaction croisée avec l'Akt1/PKBα lorsqu'elle n'est pas phosphorylée au niveau du résidu Ser473.

Réactivité attendue avec la plupart des espèces en raison de l'homologie à 100 % de la séquence avec les espèces de vertébrés les plus courantes.

Format : Produit purifié

IgG1κ monoclonale de souris purifiée dans un tampon à base de Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4), 150 mM de NaCl et 0,05 % de NaN3

Analyse par western blotting :
une concentration de 0,5-1 µg/ml de ce lot a permis de détecter l'Akt phosphorylée dans des lysats de fibroblastes NIH-3T3 de souris traités avec 100 ng/ml de PDGF pendant 20 minutes.

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.