Anticorps anti-acétyl-histone H3 (Lys27)

Produit évalué par western blotting sur des cellules HeLa extraites en milieu acide et traitées avec 5 mM de butyrate de sodium.

Analyse par western blotting : Une dilution au 1/5000e de cet anticorps a permis de détecter l'acétyl-Histone H3 (Lys27) dans des cellules HeLa extraites en milieu acide et traitées avec 5 mM de butyrate de sodium.

Témoin
Protéines extraites en milieu acide de cellules HeLa traitées au butyrate de sodium

Analyse par ChIP-seq : une immunoprécipitation de la chromatine a été réalisée avec le kit Magna ChIP HiSens (réf. 17-10460), 2 µl d'anticorps anti-acétyl-histone H3 (Lys27) (réf. 07-360), 20 µl de billes avec protéines A/G, et la chromatine de 1e6 cellules HeLa réticulée, suivie d'une purification de l'ADN à l'aide de billes magnétiques. Des banques ont été préparées à partir des échantillons d'ADN de départ et ChIP selon des protocoles standards avec des adaptateurs à code-barres Illumina, puis analysées sur un instrument Illumina HiSeq. Plus de quatorze millions de lectures ("read") tirées de fichiers FastQ ont été cartographiées avec Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) après suppression des étiquettes ("tag") avec TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Les pics ont été identifiés à l'aide de l'algorithme MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/) après visualisation des pics et des lectures sous forme de piste personnalisée ("custom track") dans UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu) à partir de fichiers BigWig et BED. Les 25 % de pics les plus élevés identifiés dans l'ensemble de données 07-360 montraient 96 % de chevauchement avec les pics identifiés dans la piste ENCODE H3K27Ac BROAD Histone pour les cellules HeLa S3.

Domaine de recherche
Épigénétique et fonction nucléaire

L'anticorps anti-acétyl-Histone H3 (Lys27) est un anticorps polyclonal de lapin destiné à la détection de l'Histone H3 acétylée au niveau de la lysine 27. Également appelé "Anti-H3K27ac", cet anticorps a été publié dans des revues à comité de lecture. Sa spécificité a été vérifiée par dot blot (DB) et validée par ChIP, ChIP-seq, WB, DB et Mplex.

Sous-domaine de recherche
Histones

Reconnaît l'histone H3 acétylée au niveau du résidu lysine 27.

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17 kDa

L'histone H3 (UniProt : P61830) est codée par le gène HHT1 (également appelé YBR010W, YBR0201, HHT2, SIN2, YNL031C ou N2749) (ID du gène : 852295) dans la levure. L'histone H3 est un composant central du nucléosome. Les nucléosomes permettent d'enrouler et de compacter l'ADN sous forme de chromatine, ce qui limite l'accès à l'ADN de la machinerie cellulaire qui a besoin d'ADN comme matrice. L'histone H3 peut subir diverses modifications post-traductionnelles qui activent ou répriment l'expression des gènes. L'histone H3 peut faire l'objet d'une mono-, di- ou triméthylation. Il a été démontré que l'H3K27 triméthylée est étroitement associée aux promoteurs de gènes inactifs et que l'H3K27 monométhylée est associée aux promoteurs actifs. Le schéma de distribution de l'H3K27 diméthylée est similaire à celui de l'H3K27. L'histone H3 peut également subir une acétylation au niveau des Lys9, 14, 18, 23, 27 et 56. L'acétylation de l'histone H3 entraîne l'activation transcriptionnelle. L'acétylation de l'histone définit l'ouverture de la chromatine, car les histones acétylées ne peuvent pas s'amasser aussi bien que les histones désacétylées. L'H3K27ac est une marque activatrice importante qui permet de distinguer les éléments activateurs actifs et en attente. Les gènes activateurs proximaux non enrichis en H3K27ac présentent des niveaux d'expression inférieurs à ceux du gène activateur proximal moyen. Il a été démontré que les quantités d'H3K27ac diminuent progressivement entre le stade pronucléaire le plus précoce et le stade 8 cellules, qui correspond à l'activation majeure du génome embryonnaire (EGA), avec ensuite une ré-acétylation d'H3K27 à partir du stade morula qui accompagne la première spécification du lignage cellulaire dans les embryons FIV. Chez la drosophile, l'H3K27ac est présente à des taux élevés dans les embryons précoces et diminue après 4 heures à mesure que le taux d'H3K27 triméthylé augmente. (Réf. : Creyghton, MP et coll. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107[50]; 21931-21936; Tie, F et al [2009]. Dvelopment 136 [18]; 3131-3141.)

Peptide linéaire conjugué à de la KLH correspondant à 11 acides aminés de la région N-terminale de l'histone H3 humaine acétylée au niveau de la lysine 27.

Épitope : Lys27

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.

Antisérum polyclonal de lapin contenant 0,05 % d'azide de sodium et 30 % de glycérol.

Produit non purifié

Conserver à -20 °C pendant 2 ans à partir de la date d'expédition. À diviser en aliquotes pour éviter les congélations et décongélations répétées. Pour récupérer le maximum de produit, centrifuger le flacon d'origine après décongélation et avant de retirer le capuchon.

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