Anticorps anti-ADAM 10 (extrémité C-terminale)

80-85 kDa

ADAM10 est un membre de la famille ADAM (protéines à domaine du type "a disintegrin and metalloprotease"). Cette protéine clive le précurseur lié à la membrane du TNF-alpha au niveau de 76-Ala-|-Val-77 pour donner sa forme mature soluble. Elle est responsable de la libération protéolytique de plusieurs protéines de la surface cellulaire, notamment le facteur de type EGF se liant à l'héparine ou l'éphrine-A2, et du clivage constitutif et régulé de la protéine précurseur de l'amyloïde (APP) par l'alpha-sécrétase. Elle contribue au clivage normal de la protéine prion cellulaire et est impliquée dans le clivage de la molécule d'adhérence L1 à la surface des cellules et dans les vésicules membranaires libérées, ce qui suggère une activité protéase de type vésiculaire.

Le facteur de nécrose tumorale alpha est une cytokine pro-inflammatoire qui intervient dans tout un éventail de réponses aux maladies inflammatoires et dans la mort cellulaire programmée. Le récepteur Notch et son ligand participent aux décisions touchant au devenir des cellules durant le développement des vertébrés, et sont associés chez l'homme à plusieurs troubles, notamment un lymphome T. TNA-alpha, notch et son ligand delta sont tous des molécules liées à la membrane, qui sont clivées par des protéases pour libérer des protéines matures ou un récepteur fonctionnel. Il a récemment été découvert que ADAM10-, une métalloprotéase-désintégrine de la famille des protéines de mammifère ADAM (comportant un domaine "a disintegrin and metalloproteinase"), clive TNF-alpha, notch et son ligand delta (1-3). Les gènes codant pour la protéine ADAM10 humaine, de souris et de bovin ont récemment été clonés et désignés respectivement ADAM10, kuzbanian (KUZ) et MADM (1,2,4). L'ARNm d'ADAM10 est exprimé dans divers tissus humains et bovins.

Anticorps dirigé contre un peptide correspondant aux acides aminés 732-748 de la protéine ADAM10 humaine (Rosendahl, M.S., 1997). Cette séquence est identique à celles d'origine bovine et de rat, et ne diffère de celle de la protéine ADAM10 de souris que d'un acide aminé (Pan, D., 1997; Howard, L., 1996).

Épitope : a.a. 732-748 de la protéine ADAM10 humaine

Western blots :
Dilution au 1/500-1/2000e. Il est possible d'utiliser du lysat de cellules Jurkat entières comme contrôle positif ; une bande à 85 kDa, susceptible de correspondre à un précurseur, peut être détectée. Une bande pâle a été détectée à 60 kDa dans certaines lignées cellulaires, notamment les cellules Jurkat : cette bande semble représenter la protéine mature transformée. Dans certaines préparations, un excès d'anticorps primaire peut générer de multiples bandes. La présence de formes glycosylées et de produits de dégradation peut faire apparaître d'autres bandes. Une importante proforme est généralement observée vers 80-85, associée à des bandes à 60 et en-dessous de 50 kDa dans certains cas. Il est possible de se procurer le peptide immunogène (réf. AG533) pour réaliser des études de blocage d'anticorps.

Les dilutions de travail optimales doivent être déterminées par l'utilisateur final.

Immunohistochimie :
Un précédent lot de cet anticorps a permis de détecter la protéine ADAM10 dans du tissu rénal et du tissu de carcinome de cellules rénales fixés au formol et inclus en paraffine (Gutwein, P., et al. EUROPEAN JOURNAL OF CANCER. 45(2009):478–489).

Immunofluorescence :
Un précédent lot de cet anticorps a permis de détecter la protéine ADAM10 dans des cellules RCC4 (carcinome de cellules rénales) et A498 (Gutwein, P., et al. EUROPEAN JOURNAL OF CANCER. 45(2009):478–489).

L'utilisation de cet anticorps anti-ADAM10 (extrémité C-terminale) a été validée en WB pour la détection de la protéine ADAM10.

Reconnaît l'extrémité C-terminale de ADAM10.

Format : Produit purifié

Stable pendant 1 an à -20 ºC en aliquotes non diluées à partir de la date de réception.

Recommandations d'utilisation :
Dès réception, et avant retrait du bouchon, centrifuger le flacon et mélanger délicatement la solution. Diviser en aliquotes dans des tubes de microcentrifugation et les stocker à -20 °C. Éviter les congélations/décongélations répétées, qui peuvent détériorer les IgG et nuire aux performances du produit.

Contrôle
La protéine ADAM10 est exprimée de manière ubiquitaire. MDA-MB231 (lignée cellulaire de cancer du sein humain connue pour exprimer de forts niveaux d'ADAM10).

Produit évalué en routine par western blotting sur des lysats de cellules RAW264.7.

Western blotting : Une dilution au 1/500e de ce lot a permis de détecter ADAM10 dans 10 μg de lysats de cellules RAW264.7.

Concentration : La concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.

Remplace : AB19031

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