Human Fibronectin

Domaine de recherche
Structure cellulaire

Les barrettes pour l'étude de l'adhérence cellulaire Millicoat se présentent sous la forme de barrettes de 12 × 8 puits détachables en plaques de 96 puits, pour des essais pratiques et polyvalents.

PROCÉDURE :

REMARQUE : la durée et les performances optimales du test peuvent varier selon les lignées cellulaires, mais peuvent généralement être obtenues en utilisant des cultures de cellules sous-confluentes dans l'essai décrit ci-dessous. Les cultures sous-confluentes peuvent être obtenues en divisant les cellules 1 à 2 jours avant de réaliser le test.

1. Réhydrater les barrettes avec 200 ml de PBS par puits pendant au moins 15 minutes à température ambiante. Retirer le PBS des barrettes réhydratées.

2. Préparer une suspension de cellules individuelles, de préférence avec un tampon de dissociation non enzymatique. La densité cellulaire optimale peut être déterminée par titrage des cellules. La plage de départ habituellement utilisée se situe entre 1 × 10e5 et 1 × 10e7 cellules/ml.

3. Ajouter à chaque puits 100 ml de la suspension de cellules diluée. Incuber la plaque à 37 °C pendant 1 heure dans un incubateur à CO2. Laver délicatement la plaque à 2 ou 3 reprises avec du PBS contenant des ions Ca2+/Mg2+ (200 ml/puits).

4. Ajouter à chaque puits 100 ml de cristal violet à 0,2 % dans de l'éthanol à 10 %. Incuber pendant 5 minutes à température ambiante. Retirer le colorant des puits. Laver délicatement la plaque à 3 reprises avec du PBS (300 ml/puits).

5. Ajouter à chaque puits 100 ml de tampon de solubilisation (mélange 50/50 de NaH2PO4 0,1 M à pH 4,5 et 50 % éthanol). Laisser les barrettes incuber à température ambiante et les secouer doucement jusqu'à ce que le colorant fixé aux cellules soit complètement solubilisé (cela prend environ 5 minutes).

6. Déterminer l'absorbance à 540-570 nm sur un lecteur de microplaque.

Sauf indication contraire dans notre catalogue ou toute autre documentation associée au(x) produit(s), nos produits sont uniquement destinés à la recherche et ne sauraient être utilisés à d'autres fins, ce qui inclut, sans s'y limiter, les utilisations commerciales non autorisées, les utilisations diagnostiques in vitro, les utilisations thérapeutiques ex vivo ou in vivo, ou tout type de consommation ou d'application chez l'être humain ou chez l'animal.

L'adhérence cellulaire joue un rôle majeur dans la communication et la régulation cellulaires, et est fondamentale pour le développement et la maintenance des tissus. Les scientifiques étudient en permanence l'adhérence et la migration de nombreux types de cellules différents sur diverses protéines composant la matrice extracellulaire (MEC). Les barrettes pour l'étude de l'adhérence cellulaire Millicoat se présentent sous la forme de barrettes de 12 × 8 puits détachables en plaques, pour des essais pratiques et polyvalents. Les puits des rangées A à G ont été recouverts de fibronectine humaine. La rangée H de chaque barrette est enduite de BSA, qui sert de contrôle négatif aux essais. Les cellules sont ensemencées sur le substrat enduit. Puis les cellules adhérentes sont fixées et marquées. L'adhérence relative est déterminée par lecture de l'absorbance.

96 puits

Peut être conservé entre 2 et 8 °C dans le sachet en aluminium pendant au moins 3 mois. Les barrettes non utilisées peuvent être replacées dans le sachet et stockées. Veiller à ce que le dessiccant reste à l'intérieur du sachet, et que le sachet soit fermé hermétiquement.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

MILLICOAT is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany