Anticorps anti-neurofilament 70 kDa, clone DA2

Domaine de recherche
Neurosciences

Immunoblotting et immunohistochimie (coupes congelées, faible réactivité sur les tissus fixés au formol et inclus en paraffine). Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

PROTOCOLE D'IMMUNOHISTOCHIMIE POUR LA RÉFÉRENCE MAB1615

Cet anticorps a été utilisé avec succès sur du tissu cérébral de rat de 30 mm, fixé avec 4 % de paraformaldéhyde et flottant librement. Toutes les étapes doivent être réalisées sous agitation constante. Suggestion de protocole :

1) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS (avec ou sans 0,25 % de Triton).

2) Incubation pendant 30 minutes dans du TBS contenant 3 % de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire).

3) Incubation de l'anticorps primaire convenablement dilué dans du TBS contenant 1 % de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire) (avec ou sans 0,25 % de Triton) pendant 2 heures à température ambiante puis pendant 16 heures à 4 °C.

4) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

5) Incubation avec l'anticorps secondaire convenablement dilué dans du TBS contenant 1% de sérum (de la même espèce que l'hôte de l'anticorps secondaire).

6) 3 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

7) ABC Elite (de Vector Labs, dilution au 1/200e) dans du TBS.

8) 2 lavages de 10 minutes chacun dans du TBS.

9) 1 lavage de 10 minutes dans du tampon phosphate (non salin).

10) Réaction avec de la DAB après ajout de 0,06 % de NiCl pour intensifier la réaction.

11) 2 lavages de 10 minutes chacun dans du PBS.

12) 1 lavage de 10 minutes dans du tampon phosphate (non salin).

L'utilisation de cet anticorps anti-neurofilament de 70 kDa, clone DA2, a été validée en western blotting, immunocytochimie et immunohistochimie pour la détection du neurofilament de 70 kDa.

Sous-domaine de recherche
Métabolisme des neurones et neurofilaments

Marqueurs neuronaux et gliaux

Reconnaît la sous-unité du triplet de neurofilaments (NF-L) de faible poids moléculaire (68-70 kDa) ; l'épitope est indépendant du phosphate. Réagit chez l'être humain et les vertébrés supérieurs.

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Les neurofilaments sont un type de filament de taille intermédiaire et un élément essentiel du cytosquelette soutenant le cytoplasme des axones. Ce sont les composés fibrillaires les plus abondants des axones, 3 à 10 fois plus fréquents en moyenne que les microtubules axonaux. Les neurofilaments (10 nm de diamètre) sont construits à partir de trois protofibrilles entrelacées, elles-mêmes composées de deux complexes de protofilaments tétramériques de protéines monomères. Ce triplet de protéines du neurofilament (68/70 kDa, 160 kDa et 200 kDa) est présent dans le système nerveux central et périphérique, et est généralement spécifique des neurones. La chaîne légère de 68/70 kDa (protéine NF-L) peut s'autoassembler en une structure filamenteuse, tandis que la chaîne moyenne de 160 kDa (protéine NF-M) et la chaîne lourde de 200 kDa (protéine NF-H) ont besoin de la présence de la chaîne légère de 68/70 kDa pour s'assembler. Les névromes, les ganglioneuromes, les gangliogliomes, les ganglioneuroblastomes et les neuroblastomes présentent une coloration positive pour les neurofilaments. Bien qu'ils se cantonnent généralement aux neurones, des neurofilaments ont été détectés dans des paragangliomes et des phéochromocytomes surrénaliens et extra-surrénaliens. Les tumeurs carcinoïdes, les carcinomes neuroendocrines cutanés et les carcinomes bronchopulmonaires à petites cellules expriment également des neurofilaments. Pour plus d'informations sur les neurofilaments, voir le tableau en ligne "Nervous System Cell Type Specific Marker" dans la section Support technique.

Neurofilaments de cochon à déphosphorylation enzymatique.

Remplace le(s) produit(s) suivant(s) : 04-1112

En solution. Sans conservateurs.

À conserver à -20 °C, en aliquotes non diluées, pendant 12 mois maximum. Éviter les congélations-décongélations répétées.

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