Anticorps anti-laminine-5 (chaîne γ2), clone D4B5

Témoin
Tissu tumoral pancréatique humain, tissu de carcinome du sein humain ou lysat de cellules A-431 entières

Évaluation par western blotting sur la laminine-5 recombinante.

Analyse par western blotting : Une dilution au 1/500-1/2000e de cet anticorps a permis de détecter une chaîne gamma2 de laminine-5 dans 10 µg de laminine-5 recombinante humaine.

Domaine de recherche
Structure cellulaire

L'anticorps anti-laminine-5 (chaîne γ2), clone D4B5, est un anticorps dirigé contre la laminine-5 (chaîne γ2) destiné aux analyses par ELISA, IH(P) et WB.

Sous-domaine de recherche
Protéines de la MEC

Western blotting : quantité recommandée de 5 ug/ml ; diluer l'anticorps dans du PBS ou du TBS uniquement, et non dans des solutions de blocage. Le blocage avec des composés purifiés est préconisé.

Immunohistochimie des coupes en paraffine : quantité recommandée de 5 à 10 ug/ml. Ne pas fixer à l'excès. Un PFA léger à 4 % ou 2 % est préférable. Les coupes en paraffine de 4 mm d'épaisseur sont déparaffinées, réhydratées et immergées dans du méthanol contenant du peroxyde d'hydrogène à 0,3 % pour désactiver la peroxydase intrinsèque, puis traitées à la protéase XXIV (Sigma) pendant 15 min à température ambiante (0,01 à 0,05 %). Ne pas utiliser de trypsine. Incubation des anticorps à 37 °C pendant 1 heure, suivie de la détection et de la visualisation des anticorps secondaires par DAB (Mizushima et al 1998). Ne pas placer l'anticorps monoclonal dans des blocs de sérum, car le sérum contient de la laminine-5 qui se lie à l'anticorps et interfère avec celui-ci. Utiliser plutôt du BSA ou tout autre milieu équivalent.

Un marquage fortement positif est observé dans la membrane basale des tissus suivants : peau, œsophage, poumon et rein. Un marquage positif est également observé dans l'estomac, l'intestin grêle, la rate, le thymus, la prostate, et les ovaires. La thyroïde, le testicule, le squelette et le muscle cardiaque étaient négatifs pour le marquage à la LN5.

Inhibition de l'intégrine alpha2bêta1 se liant à la laminine-5 (40 ug/ml) (Decline et Rousselle 2000).

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales pour ELISA.

L'anticorps monoclonal MAB19562 a été développé contre les résidus d'acides aminés 382-608 de la chaîne gamma2 de la laminine-5 humaine (domaine III) exprimés en tant que protéine de fusion GST. L'anticorps reconnaît les protéines de la chaîne de la laminine-5 à 150 kDa (forme précurseur) et 105 kDa (forme mature). Aucune réactivité n'est attendue avec d'autres types de laminines, car la chaîne gamma2 est propre à la laminine-5.

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150 kDa (forme précurseur) et 105 kDa (forme mature)

Les laminines, des glycoprotéines présentes dans la matrice extracellulaire de la membrane basale, sont composées de chaînes hétérotrimériques alpha, bêta et gamma. Différentes combinaisons de cinq chaînes alpha, trois chaînes bêta et deux chaînes gamma constituent au moins 12 isoformes de laminine. La laminine-5 (LN5), formée de chaînes de laminine alpha3, bêta3 et gamma2, est un composant hautement conservé des filaments d'ancrage sous-jacents à l'hémidesmosome des kératinocytes épidermiques. Les mutations ou délétions dans les gènes LN5 (LAMA3, LAMB3 et LAMC2) sont associées à l'épidermolyse bulleuse, une maladie mortelle qui se manifeste par des cloques cutanées. La LN5 peut stabiliser la jonction épiderme/derme de la peau par liaison avec les intégrines alpha3/bêta1, alpha6/bêta4 et le collagène de type VII. Elle joue un rôle critique dans l'ancrage et la locomotion de nombreux types de cellules, notamment les cellules épithéliales, les fibroblastes, les neurones et les leucocytes. Par rapport aux fibronectines, au collagène ou à la vitronectine, la laminine-5 assure une adhésion plus rapide et une propagation plus vaste des cellules d'origine épithéliale. Récemment, les chercheurs se sont intéressés à la laminine-5 comme substrat des cellules de carcinome susceptibles de stimuler la migration, car elle a été détectée à l'avant-garde du tissu cancéreux invasif dans plusieurs types de carcinomes humains (Niki et coll., 2002, Lohi, et coll., 2001).

Résidus d'acides aminés 382-608 de la chaîne gamma2 de la laminine-5 humaine (domaine III) à expression en tant que protéine de fusion GST

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.

Format : purifié

Immunoglobuline de souris purifiée sur protéine A dans 20 mM de phosphate de sodium et 250 mM de NaCl à pH 7,6, avec 0,1 % d'azide de sodium comme conservateur.

Purification sur protéine A

Conserver entre 2 et 8 °C pendant 1 an à compter de la date d'expédition. À diviser en aliquotes pour éviter les congélations et décongélations répétées. Pour récupérer le maximum de produit, centrifuger le flacon d'origine après décongélation et avant de retirer le capuchon.

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