Anti-Collagen Type I (COL1A1) Antibody

Témoin
Lysat rénal humain

Domaine de recherche
Structure cellulaire

ELISA : détection du collagène natif de type I. Capture : 2 à 4 µg/ml. Détection : une concentration de 10 µg/ml d'anticorps anti-collagène de type I permet de détecter 50 ng de collagène humain de type I sans aucune réactivité croisée avec les autres types de collagène. Une concentration d'anticorps plus élevée pourrait être nécessaire pour détecter des concentrations de collagène plus faibles. Remarque : l'anticorps ne se lie pas avec lui-même.

Immunohistochimie : coupes non-fixées congelées :

Couper des sections d'une épaisseur de 6 µm à partir d'échantillons congelés à l'aide d'un microtome à congélation. Laisser sécher complètement à l'air libre. Réhydrater avec du PBS. Le blocage n'est généralement pas nécessaire pour les analyses en IF. En cas d'utilisation de DAB, il est suggéré d'effectuer un prétraitement à la peroxydase et le blocage avec 2 % de BSA dans du PBS permet de réduire le bruit de fond.

Diluer l'anticorps anti-collagène de type I dans du PBS, ajouter à/aux échantillon(s) et incuber pendant 60 minutes. (1/100e-1/500e).

Laver les coupes deux fois dans du PBS pendant 10 minutes. Ajouter l'anticorps anti-souris conjugué au FITC et incuber pendant 60 minutes.

Laver deux fois dans du PBS pendant 10 minutes.

Monter les coupes sur un mélange glycérol/eau (9/1 v/v) contenant de la 1,4-phénylènediamine 1 mM. (pour la stabilité du FITC ou utiliser les références produit Chemicon 5096 ou 5013.)

REMARQUE :

des études préliminaires suggèrent que le marquage renforcé de certains tissus pourrait être obtenu par traitement (avant l'étape 2) des coupes avec différentes enzymes (p. ex., pepsine à 0,1 % dans 0,1 M DE HCl à 37 °C pendant 5 minutes).

Cytométrie en flux : dilution au 1/100e

Immunoblotting : dilution au 1/1 000e en utilisant uniquement des Western blots natifs, non dénaturés et non réduits. Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. L'anticorps ne fonctionne pas dans les Western blots classiques réduits.

Les gels PAGE doivent être préparés pour l'analyse des collagènes natifs.

Un gel séparateur d'acrylamide total à 3 % (p/v), contenant 3,2 % (p/p) de bis-acrylamide en proportion d'un monomère comme agent de réticulation, dans du lactate de calcium 10 mM (pH 6,8) est polymérisé entre des plaques de verre verticales par l'ajout de 0,05 à 0,1 % de TEMED et de 0,05 à 0,1 % de persulfate d'ammonium (ajouté à partir d'une solution mère à 10 %). Le tampon de cathode (négatif) est un tampon Tris 50 mM ajusté à un pH de 6,6 avec de l'acide lactique ; le tampon anodique (positif) est un tampon d'acide lactique 0,1 M, pH 2,5 {Friis, S.J. et al., 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.}.

Avant le chargement de l'échantillon, le gel est maintenu pendant au moins 90 minutes à 100 V. Les échantillons de collagène sont dissous à 1 mg/ml soit dans 0,1 M d'acide lactique, soit dans 0,1 M d'acide acétique contenant 10 % de saccharose et 5 à 10 µg sont appliqués par piste. Du vert de méthyle est ajouté selon les besoins pour aider le chargement. L'électrophorèse se déroule à 70 V pendant 5 heures à température ambiante.

Le blotting utilise de l'acide lactique 0,1 M (pH 2,5) et est réalisé à 20 V pendant 16 heures à température ambiante, avec une migration des collagènes vers la cathode.

L'utilisation de cet anticorps anti-collagène de type I, clone 5D8-G9, est validée en ELISA, en FC, en WB et en IH pour la détection du collagène de type I.

Sous-domaine de recherche
Protéines de la MEC

L'anticorps anti-collagène de type I est un anticorps IgG1 monoclonal qui se lie à un épitope proche de l'extrémité C-terminale du collagène de type I.

L'anticorps anti-collagène de type I montre une grande affinité avec les collagènes de type I humain, bovin et ovin. Il n'y a pas de signe de réactivité croisée avec les collagènes de types III, V et VI, ni avec les protéines du tissu conjonctif. L'anticorps réagit uniquement avec le collagène I natif non dénaturé

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Les collagènes sont largement conservés au cours de l'évolution et ils sont caractérisés par la répétition ininterrompue du triplet "Glycine X Y" qui est un élément indispensable de la structure en triple hélice. Le collagène de type I (95 kDa) se trouve dans les os, la cornée, la peau et les tendons. Les mutations du gène codant sont associées à l'ostéogenèse imparfaite, au syndrome d'Ehlers Danlos et à l'ostéoporose idiopathique. Des translocations réciproques entre les chromosomes 17 et 22, où se trouvent ce gène et le gène du facteur de croissance dérivé des plaquettes bêta, sont associées à un type particulier de tumeur cutanée appelée dermatofibrosarcome protuberans, qui résulte d'une expression non régulée du facteur de croissance.

100 µg d'anticorps purifié à une concentration de 1 mg/ml dans du Tris acétate 50 mM et du NaCl 150 mM.

La fraction d'immunoglobuline a été purifiée par chromatographie avec protéine A et s'est révélée pure à > 95 % par PAGE avec coloration coomassie. L'anticorps anti-collagène de type I est livré filtré à 0,22 micron.

Format : Produit purifié

L'anticorps anti-collagène de type I est expédié sous forme liquide à température ambiante. Ce produit est stable jusqu'à 6 mois s'il est conservé à une température comprise entre 2 et 8 °C.

ATTENTION : Le réactif monoclonal contient 0,1 % d'azoture de sodium en guise de conservateur. En raison des dangers liés à l'accumulation de cette substance dans les canalisations, le réactif usagé doit être dilué dans beaucoup d'eau avant d'être rejeté.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany