Anticorps anti-protéine Mi (microphtalmie), clone C5

Produit évalué en routine par western blotting sur des lysats de cerveau de souris.

Analyse par western blotting :
Une dilution au 1/500e de ce lot a permis de détecter la protéine Mi dans 10 μg de lysats de cerveau de souris.

Témoin
Cellules de mélanome humain 501 Mel, ostéoclastes de souris, de rat et d'être humain de type sauvage.

Immunoprécipitation :
Un précédent lot de cet anticorps a été utilisé en immunoprécipitation (2 µg/mg de lysat protéique).

Tests de super-retard de migration électrophorétique :
Un précédent lot de cet anticorps a été utilisé des tests de retard de migration électrophorétique (technique EMSA).

Immunohistochimie sur coupes en paraffine :
Un précédent lot de cet anticorps a été utilisé dans en immunohistochimie sur des cryocoupes et des coupes de tissus fixés au formol et inclus en paraffine.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

L'anticorps anti-protéine Mi (microphtalmie), clone C5, est un anticorps monoclonal de souris permettant de détecter la protéine Mi (microphtalmie), également connue sous le nom de facteur de transcription associé à la microphtalmie (MiTF). Il a été testé dans des expériences de retard de migration électrophorétique, en immunohistochimie, en immunohistochimie sur coupes en paraffine, en immunoprécipitation et en western blotting.

En western blotting, il reconnait un doublet de 52 à 56 kDa, identifié comme une forme phosphorylée en sérine et une forme non phosphorylée d'isoformes mélanocytaires de la protéine Mi (microphtalmie). Il existe deux isoformes connues de la protéine Mi, qui diffèrent de 66 acides aminés au niveau de l'extrémité NH2. Les formes courtes sont exprimées dans les mélanocytes et migrent en deux bandes de 52 kDa et 56 kDa, tandis que la forme longue de la protéine Mi migre en un groupe de bandes de 60 à 70 kDa dans les ostéoclastes et les cellules de mélanome B16 (mais aucune autre lignée de cellules de mélanome) ainsi que dans les mastocytes et les cellules cardiaques. Cet anticorps réagit avec les isoformes mélanocytaires et non mélanocytaires de la protéine Mi. Il ne réagit pas de façon croisée avec les autres facteurs de type bHLH-ZIP dans les tests de retard de migration électrophorétique de l'ADN.

53 à 56 kDa

Le facteur de transcription associé à la microphtalmie (MiTF pour "Microphthalmia-associated Transcription Factor") est un facteur de transcription à motifs basiques hélice-boucle-hélice et à glissière à leucines (bHLH-ZIP) impliqué dans la pigmentation, le développement des mastocytes et le développement osseux. Des mutations de la protéine MiTF sont à l'origine d'anomalies auditives et pigmentaires, comme le syndrome de Waardenburg de type II ou IIa et le syndrome de Tietz chez l'être humain. Il existe deux isoformes connues de la protéine MiTF, qui diffèrent de 66 acides aminés au niveau de l'extrémité NH2. Les formes courtes sont exprimées dans les mélanocytes et migrent en deux bandes de 52 kDa et 56 kDa, tandis que la forme longue (protéine Mi) migre en un groupe de bandes de 60 à 70 kDa dans les ostéoclastes et les cellules de mélanome B16 (mais aucune autre lignée de cellules de mélanome) ainsi que dans les mastocytes et les cellules cardiaques. Le MiTF joue un rôle clé dans la différenciation de différents types de cellules, notamment les mélanocytes dérivés de la crête neurale, les mastocytes, les ostéoclastes, et l'épithélium pigmentaire rétinien dérivé de la cupule optique. La protéine Mi est un facteur de transcription à motifs basiques hélice-boucle-hélice et à glissière à leucines (bHLH-ZIP) impliqué dans la pigmentation, le développement des mastocytes et le développement osseux. La mutation de la protéine Mi provoque le syndrome de Waardenburg de type II chez l'être humain. Chez la souris, elle entraîne une importante perte de cellules pigmentées au niveau de la peau, de l'œil et de l'oreille interne, ainsi qu'une ostéopétrose et un déficit en lymphocytes tueurs naturels et en mastocytes. Une cartographie bidimensionnelle après hydrolyse trypsique a révélé que ces isoformes mélanocytaires diffèrent en termes de phosphorylation par la voie c-Kit. La souche de rat ostéopétrotique comporte une grande délétion génomique couvrant la moitié 3' de la protéine Mi, incluant la majeure partie de la région bHLH-ZIP. Les ostéoclastes de ces animaux n'expriment pas la protéine Mi, à la différence des ostéoclastes d'être humain, de souris et de rat de type sauvage.

Hybridome issu de la fusion de splénocytes de souris RBF/DnJ, immunisées avec un fragment N-terminal de la protéine Mi humaine, et de cellules NS1 de myélome de souris.

Concentration : la concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.

Format : purifié

IgG1 monoclonale de souris purifiée, dans un tampon phosphate salin contenant 0,08 % d'azoture de sodium.

Stable à -20 ºC, en aliquotes non diluées, pendant 1 an à compter de la date de réception.
Recommandations relatives à la manipulation du produit : Après réception, et avant de retirer le bouchon, centrifuger le flacon et mélanger délicatement la solution. Répartir en aliquotes dans des microtubes à centrifuger et conserver à -20 °C. Éviter les congélations/décongélations répétées qui peuvent endommager les IgG1 et altérer les performances du produit.

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