Anticorps anti-NeuN, clone A60, conjugué à la biotine

Produit évalué en routine par immunohistochimie sur des tissus cérébraux.

Analyse par immunohistochimie (paraffine) :
profil de coloration/morphologie de NeuN (réf. MAB377B) dans le cervelet de rat. Tissus prétraités au citrate, pH 6,0. Ce lot d'anticorps a été dilué au 1/100e, avec détection par HRP-DAB IHC-Select. L'immunoréactivité est observée sous forme de coloration nucléaire dans les neurones de la couche granulaire. À noter, aucun signal n'est détecté dans le noyau des cellules de Purkinje.
Coloration optimale en tampon citrate, pH 6,0, démasquage de l'épitope : cervelet de rat

Témoin
Tissu cérébral, la plupart des types de cellules neuronales dans le système nerveux de l'adulte.

Analyse par immunocytochimie :
une dilution au 1/10e-1/500e d'un lot antérieur a été utilisée. Les neurones en culture doivent être perméabilisés au triton X-100 à 0,1 %. Toutes les dilutions d'anticorps primaires doivent être préparées dans des solutions simples contenant seulement du tampon et l'anticorps, sans ajouter un excès de protéines de blocage ou de détergents.

Pour les études à double marquage utilisant des anticorps monoclonaux de souris, les incubations d'anticorps doivent être réalisées de manière séquentielle, et l'incubation avec le MAB377B doit être faite en dernier. L'anticorps monoclonal de souris doit d'abord être détecté avec un anticorps secondaire anti-souris avant incubation avec le MAB377B. Un excès d'IgG anti-souris peut être bloqué en incubant avec du sérum de souris à 1 % avant incubation avec le MAB377B. La détection de l'anticorps monoclonal anti-NeuN biotinylé se fait grâce à la streptavidine. Dans certains cas, il peut être nécessaire de prétraiter les tissus avec de l'avidine afin de bloquer l'excès de biotine avant de réaliser un test d'immunohistochimie (Wood et Warnke, 1981).

Immunohistochimie :
dilution au 1/200e-1/2 000e. L'anticorps donne de meilleurs résultats sur les tissus inclus en cire de polyester, mais peut aussi être utilisé sur des tissus inclus en paraffine avec un facteur de dilution plus faible pour la solution de travail. Les fixateurs à base de formaldéhyde sont adaptés à cet anticorps. Un prétraitement par acide citrique et micro-ondes a également été utilisé avec succès (Sarnat, 1998).

Analyse par western blotting :
un précédent lot de cet anticorps a été utilisé en western blotting. Reconnaît 2 à 3 bandes dans la plage de 46 à 48 kDa, et potentiellement une autre bande d'environ 66 kDa.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

Domaine de recherche
Neurosciences

L'utilisation de cet anticorps anti-NeuN, clone A60, conjugué à la biotine, a été validée en IC, IH, IH(P) et WB pour la détection de la protéine NeuN.

Sous-domaine de recherche
Marqueurs neuronaux et gliaux

Protéine nucléaire spécifique des neurones de vertébrés appelée NeuN (pour "Neuronal Nuclei" – noyaux neuronaux). Le MAB377B réagit avec la plupart des types de cellules neuronales dans tout le système nerveux de la souris, notamment le cervelet, le cortex cérébral, l'hippocampe, le thalamus, la moelle épinière et les neurones du système nerveux périphérique, y compris les ganglions rachidiens dorsaux, les ganglions de la chaîne sympathique et les ganglions entériques. La coloration immunohistochimique intervient principalement dans le noyau des neurones, et le cytoplasme présente une coloration moins intense. Les quelques types cellulaires qui ne présentent pas de réactivité avec l'anticorps MAB377B incluent les cellules de Purkinje, les cellules mitrales et les cellules photoréceptrices. Au cours du développement, l'immunoréactivité s'observe initialement peu de temps après que les neurones deviennent post-mitotiques (aucune coloration n'a été détectée dans les zones proliférantes). Cet anticorps est un excellent marqueur des neurones et cultures primaires et des cellules P19 stimulées par l'acide rétinoïque. Il est également utile pour identifier les neurones dans les greffes.

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46-48 kDa

L'anticorps anti-NeuN, clone A60, reconnaît spécifiquement la protéine NeuN (NEUronal Nuclei, noyaux neuronaux) spécifique des neurones et liée à l'ADN. Cette protéine est présente dans la majorité des types de cellules neuronales du SNC et du SNP chez tous les vertébrés testés jusqu'ici. La distribution de la protéine NeuN est apparemment limitée aux noyaux, aux péricaryons et à certains processus proximaux des neurones à la fois dans le cerveau fœtal et adulte. Néanmoins, certains neurones ne sont jamais reconnus par l'anticorps anti-NeuN, et ce indépendamment de l'âge : par exemple les cellules rétiniennes INL, les cellules de Cajal-Retzius, les cellules de Purkinje, les neurones du noyau olivaire inférieur et du noyau dentelé et les cellules ganglionnaires sympathiques (Mullen et al., 1992 ; Wolf et al., 1996). L'antigène NeuN détectable par immunohistochimie apparaît d'abord aux stades développementaux qui correspondent au retrait du neurone du cycle cellulaire ou au début de la différenciation terminale du neurone (Mullen et al., 1992). L'immunoréactivité apparaît approximativement au stade E9.5 dans le tube neural de souris et s'étend à l'ensemble du système nerveux en développement avant le stade E12.5. La coloration nucléaire intense suggère une fonction de protéine régulatrice nucléaire ; toutefois, il n'existe pas encore de données indiquant si la protéine NeuN a une fonction dans le cytoplasme distal ou si elle est simplement synthétisée à cet endroit avant d'être renvoyée vers le noyau. Aucune différence n'a été observée par immunoblotting entre la protéine isolée de noyaux purifiés et celle provenant d'un extrait de cerveau total (Mullen et al., 1992).

Noyaux cellulaires purifiés de cerveau de souris

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, veuillez vous référer au certificat d'analyse.

IgG1 monoclonale de souris purifiée, dans un tampon contenant 0,01 M de PBS (pH 7,1), 0,1 % d'azoture de sodium et 15 mg/ml de BSA comme agent stabilisateur.

Produit purifié sur protéine A.

Stable entre 2 et 8 °C pendant 1 an à compter de la date de réception.

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