Anticorps anti-BCRP1, clone 5D3

72 kDa

La protéine de résistance au cancer du sein (BCRP1), également appelée ABC (ATP-binding cassette) spécifique au placenta (ABCP) ou membre 2 de la sous-famille ABC G (ABCG2), ou encore protéine MXR (Mitoxantrone resistance protein), est un membre de la superfamille des transporteurs médicamenteux de type ABC, qui serait impliqué dans les maladies néoplasiques humaines multirésistantes. L'ABCG2 est exprimée dans les lignées cellulaires de cancer du sein, du colon et de l'estomac et de fibrosarcome résistantes aux traitements médicamenteux, ainsi que dans les cellules blastiques de patients atteints de leucémie myéloïde aiguë (LMA). Les tissus normaux qui expriment la protéine ABCG2 comprennent les syncytiotrophoblastes placentaires, les canaux et lobules mammaires, l'épithélium du gros intestin et du côlon, l'épithélium vasculaire et capillaire ainsi que la membrane canaliculaire biliaire du foie. Plusieurs études indiquent que l'ABCG2 est également exprimée dans les cellules souches de différents tissus et qu'elle pourrait constituer un bon marqueur des cellules souches. L'ABCG2 serait responsable de la capacité d'une population de cellules hématopoïétiques et non hématopoïétiques très primitives, le sous-ensemble appelé SP (Side population) à effluer le colorant fluorescent Hoechst 33342. Les résultats de la RT-PCR semi-quantitative indiquent que l'ARNm de l'ABCG2 est exprimé à des niveaux plus élevés dans les cellules SP que dans les cellules non SP des tissus hématopoïétiques humains, de singe rhésus et de souris, à l'exception des érythroblastes et des cellules NK. Dans la moelle osseuse humaine, l'expression de l'ARNm de l'ABCG2 est plus forte dans les populations de cellules hématopoïétiques primitives CD34+CD38- définies phénotypiquement que dans les cellules progénitrices CD34+CD38+ plus différenciées. L'ARNm de Bcrp1 est également exprimé dans les cellules SP du muscle squelettique murin, dans les cellules souches et progénitrices neurales et dans les cellules progénitrices dérivées des îlots pancréatiques et positives à la nestine. La surexpression du gène ABCG2 humain par transfert de gène rétroviral permet de conférer le phénotype SP aux cellules de la moelle osseuse de souris. L'ARNm de Bcrp1 est exprimé dans les fractions SP et non SP des cellules souches embryonnaires de souris. Cela suggère que les taux de la protéine Bcrp1 ne sont pas toujours reflétés par les taux d'ARNm, ou que d'autres caractéristiques des cellules souches, telles que l'état du cycle cellulaire ou l'expression d'autres transporteurs, sont également impliquées dans le phénotype SP.

Cellules 3T3 exprimant la protéine ABCG2 humaine

Domaine de recherche
Recherche sur les cellules souches

Détection de la BCRP1 à l'aide de cet anticorps anti-BCRP1, clone 5D3, dont l'utilisation a été validée en FC, IC, IF, FUNC et WB.

Immunocytochimie :
Fixation des cultures cellulaires avec du paraformaldéhyde (PFA) à 4 % pendant 5 à 15 minutes à température ambiante. Inhibition avec du sérum de chèvre à 10 % et 0,1 % de sérum albumine bovine dans du PBS contenant 0,3 % de Triton X-100 (Ginis et al., 2004).

Cytométrie en flux :
une dilution au 1/100-1/1 000e d'un précédent lot a été utilisée.

Test d'inhibition :
un lot précédent a été utilisé pour inhiber l'ABCG2 (Watanabe, K. et al., (2004. FEBS Letters 565:6-10). Voir également Sarkadi, B., et al., 2004 FEBS 567:116-120. Sarkadi indique que la détection et l'inhibition par l'anticorps 5D3 dépendent fortement de la conformation actuelle de l'ABCG2.
Inhibition avec du sérum de chèvre à 10 % et 0,1 % de sérum albumine bovine dans du PBS contenant 0,3 % de Triton X-100 (Ginis, 2004).

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

Sous-domaine de recherche
Cellules souches neurales

Cellules souches hématopoïétiques

Reconnaît spécifiquement un épitope externe de la forme humaine de l'ABCG2. Semble réagir avec des lignées de cellules souches de souris (Ginis, et al., 2004) ; la réactivité chez la souris n'est toutefois pas confirmée à l'heure actuelle.

Format : Produit purifié

IgG2bκ monoclonale de souris purifiée en solution dans un tampon contenant du PBS (pH 7,4) avec 0,1 % d'azoture de sodium.

Produit purifié sur protéine A

Stable entre 2 et 8 ºC pendant 1 an à compter de la date de réception. Ne pas congeler.

Produit évalué en routine par western blotting sur des lysats de cellules L6.

Analyse par western blotting :
une dilution au 1/500e de ce lot a permis de détecter la BCRP1 dans 10 µg de lysats de cellules L6.

Témoin
Cellules MCF-7

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.

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