Anti-Neurofilament H (200 kDa) Antibody

Les neurofilaments sont un type de filament intermédiaire qui sert d'élément majeur du cytosquelette soutenant le cytoplasme de l'axone. Ils sont les composants fibrillaires les plus abondants de l'axone, étant en moyenne 3 à 10 fois plus fréquents que les microtubules axonaux. Les neurofilaments (10 nm de diamètre) sont construits à partir de trois protofibrilles entrelacées, elles-mêmes composées de deux complexes de protofilaments tétramériques de protéines monomères. Les protéines du triplet du neurofilament (68/70, 160 et 200 kDa) sont présentes à la fois dans le système nerveux central et périphérique et sont généralement spécifiques aux neurones. La protéine NF-L de 68/70 kDa peut s'auto-assembler en une structure filamenteuse, mais les protéines NF-M de 160 kDa et NF-H de 200 kDa nécessitent la présence de la protéine NF-L de 68/70 kDa pour s'assembler. Les neuroromes, les ganglioneuromes, les gangliogliomes, les ganglioneuroblastomes et les neuroblastomes présentent une coloration positive des neurofilaments. Bien qu'ils soient généralement limités aux neurones, les neurofilaments ont été détectés dans des paragangliomes et des phéochromocytomes surrénaliens et extra-surrénaliens. Les carcinoïdes, les carcinomes neuroendocriniens de la peau et les carcinomes pulmonaires à cellules en grains d'avoine expriment également des neurofilaments. Pour plus d'informations sur les neurofilaments, voir le tableau en ligne des marqueurs spécifiques aux types cellulaires du système nerveux dans la section Support technique CHEMICON.

Segment de queue carboxy-terminale de chaîne H porcine déphosphorylée par voir enzymatique.

Domaine de recherche
Neurosciences

L'utilisation de cet anticorps anti-neurofilament de 200 kDa, clone N52, a été validée en WB et IH pour la détection du neurofilament de 200 kDa.

Sous-domaine de recherche
Métabolisme des neurones et neurofilaments

Marqueurs neuronaux et gliaux

Western blotting : 5 à 10 μg/ml

Immunohistochimie : 5 à 10 μg/ml.

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

Immunohistochimie : L′anticorps N52 réagit avec un fragment de bras latéral du neurofilament de 200 kDa (NF-200) qui est situé à la fin du domaine KSP MPR et qui contient le site consensus de phosphorylation de cdk-5, cependant cette réactivité disparaît si le fragment de NF-200 est phosphorylé par cdk-5 (Guidato et al, 1996). Il est donc conseillé, pour garantir une réactivité et un marquage optimaux, y compris dans les essais Western, de traiter les échantillons avec de la phosphatase alcaline avant marquage avec l′anticorps. Suggestion de protocole de traitement :



Protocole - Préparation des solutions :

I. Solution saline tamponnée au Tris (TBS) : Tris-HCl à 0,1 mol/l ; NaCl à 0,1 mol/l′, pH 8,0.

II. Mélanger de la phosphatase alcaline à 1 mg/ml avec 1 mol/l de ZnSO4, 1 mol/l de MgCl2 et 1 mmol/l de PMSF, puis dissoudre dans la solution TBS.

REMARQUE : Il est nécessaire de dialyser la phosphatase alcaline par rapport à la solution I avant utilisation.

Procédure :

Laisser sécher à l′air libre des coupes congelées issues d′échantillons de tissus congelés par un choc à ultra-basse température puis les fixer pendant 10 min avec de l′acétone à -20 °C. Laisser évaporer à température ambiante l′acétone en excès. Incuber les coupes dans de la solution II pendant 4 heures à +30 °C, puis les laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois. Incuber les coupes servant de témoin négatif dans de la solution II exempte de phosphatase alcaline. Poursuivre le traitement comme suit :

- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl de solution d'anticorps et incuber dans une chambre humide pendant 1 heure.

- Immerger la lame dans de la solution TBS et la laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois.

- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl d′une solution d'anticorps IgG anti-souris, marqué avec de l′isothiocyanate de fluorescéine, et incuber dans une chambre humide à 37 °C pendant 1 heure.

- Laver 3 fois la lame dans de la solution TBS pendant 5 min à chaque fois.

L′anticorps MAB5266 réagit avec la chaîne H phosphorylée et déphosphorylée du neurofilament de 200 kDa (NF-H) des tissus/extraits normux (Shaw, 1986). Il peut servir à détecter les cellules d′origine neuronale par immunohistochimie et western blotting. Il a été signalé que la réactivité de l′anticorps MAB5266 vis-à-vis de NF-H est bloquée dans les cellules surexprimant cdk-5 (Guidato, 1996).

Format : purifié

Immunoglobuline purifiée (chromatographie d'échange d′ions). En solution dans du tampon phosphate 0,02 M et du NaCl 0,25 M avec 0,1 % d'azoture de sodium, à pH 7,6.

Conserver entre 2 et 8 °C en aliquotes non diluées pendant 6 mois maximum. Éviter les congélations/décongélations répétées.

Concentration : Pour connaître la concentration spécifique du lot, veuillez vous référer au certificat d′analyse.

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