Cocktail d′inhibiteurs de protéases sans EDTA cOmplete^™

Performances évaluées à l'aide d'un extrait de pancréas.

Le cocktail d'inhibiteurs de protéases sans EDTA cOmplete^™ a été utilisé comme constituant dans :

• un tampon de lyse destiné à lyser des cellules rénales embryonnaires humaines (HEK293T) transfectées et un tampon de lyse utilisé lors d'un essai RIPA (test de radio-immunoprécipitation) pour homogénéiser un embryon de poisson zèbre
• un réactif d′extraction de protéines tissulaires (T-PER) servant à homogénéiser un tissu d′ hippocampe
• un tampon de lyse au dodécylsulfate de sodium (SDS) permettant de lyser des hépatocytes

Les produits cOmplete^™ sans EDTA inhibent efficacement les protéases à sérine et à cystéine dans les extraits de cellules bactériennes, végétales, animales et de levures. Les métalloprotéases et les protéases aspartiques ne sont pas inhibées.
Les pastilles cOmplete sans EDTA servent à inhiber l'activité protéolytique de grands volumes (jusqu'à 50 ml) dans lesquels l'EDTA est susceptible d'affecter la stabilité des protéines (par exemple, les protéines contenant des métaux) ou les analyses ultérieures. Comme l'EDTA interfère avec la chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC), les produits cOmplete sans EDTA sont utilisés de préférence dans le processus d'isolement des protéines de fusion portant une étiquette poly-His.
Si vous avez besoin d'inhiber l'activité protéolytique de volumes plus faibles (jusqu'à 10 ml), nous vous recommandons d'utiliser les produits sans EDTA Mini cOmplete.

Une pastille cOmplete sans EDTA a été ajoutée pour 50 ml de solution d′incubation. L′activité protéolytique a été déterminée avec le Substrat pour protéase universel de Roche (à base de caséine, marqué à la résorufine). S′il est nécessaire de procéder à des extractions ou des isolements en une étape à pH acide, il suffit d′ajouter de la pepstatine en plus des pastilles cOmplete sans EDTA pour inhiber les protéases (acides) aspartiques. Toutes les expériences ont été réalisées entre +15 et +25 °C.

Mélange de plusieurs inhibiteurs de protéases. Pour l'inhibition de la sérine et de la cystéine, mais pas des métalloprotéases.

Utilisez les pastilles d'inhibiteurs de protéases cOmplete pour protéger vos protéines d'un large éventail de protéases. En seulement quelques minutes, la non-inhibition de l'activité protéolytique peut dégrader la protéine que vous avez passé des jours à isoler. Chacune de ces pastilles hydrosolubles contient un mélange d'inhibiteurs de protéases qui inhibe l'activité protéolytique de la plupart des types de cellules, y compris les cellules animales, végétales, bactériennes et de levures. Aucune pesée ou mesure n'est nécessaire, ce qui garantit l'uniformité de vos résultats.

• Pratique : il vous suffit de pousser la pastille à dissolution rapide à travers le papier aluminium de l′emballage EASYpack et de la faire tomber dans votre tampon.
• Protection complète : protégez instantanément vos protéines contre une large gamme de protéases.
• Souple d'utilisation : protégez les protéines contenues dans les extraits de quasiment n'importe quels tissus ou cellules, y compris ceux d'origine animale, végétale, bactérienne, de levures ou de champignons.
• Sûr : optez pour des inhibiteurs non toxiques qui ne présentent aucun risque pour vous ou votre entourage.
• Adapté à la purification par IMAC : purifiez les protéines comportant une étiquette poly-histidine avec la résine de purification His-Tag cOmplete.

Les pastilles d'inhibiteurs de protéases cOmplete sans EDTA inhibent un large éventail de protéases à sérine et à cystéine. Contrairement à d'autres pastilles cOmplete, elles ne contiennent pas d'EDTA, ni d′autres agents chélateurs comme l′EGTA, pour ne pas affecter la stabilité et la fonction des protéines métal-dépendantes. Elles facilitent également la purification par affinité des protéines de fusion portant une étiquette Poly-His par IMAC (chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés) (aucune dialyse requise).
Grâce à leur composition optimisée, les pastilles assurent une excellente inhibition des protéases à sérine et à cystéine, et conviennent particulièrement bien à la protection des protéines isolées de tissus animaux, de plantes, de levures et de bactéries. Les pastilles cOmplete sans EDTA contiennent des inhibiteurs de protéases à la fois réversibles et irréversibles. Les métalloprotéases et les protéases aspartiques ne sont pas inhibées.

Les pastilles cOmplete sans EDTA sont identiques aux pastilles cOmplete, la seule différence étant qu'elles ne contiennent pas d'EDTA ni d'autres agents chélateurs (EGTA par exemple).

Mélange exclusif de plusieurs inhibiteurs de protéases présentant une large spécificité inhibitrice.

Produit réservé à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

20 pastilles de cocktail d′inhibiteurs de protéases cOmplete sous emballage individuel en plaquette alvéolée avec film d′aluminium.

Pastilles en plaquettes alvéolées avec scellage aluminium

Concentration de travail : 1 pastille pour 50 ml de solution d'extraction
Solution de travail : Utilisation

Pousser délicatement la pastille à travers le film en aluminium avec le pouce (pour éviter de briser la pastille, ne pas utiliser l'ongle).

Préparation de la solution de travail

Une pastilles cOmplete sans EDTA suffit à inhiber l'activité protéolytique de 50 ml de solution d'extraction. En cas d'activité protéolytique extrêmement élevée, il est recommandé d'utiliser une pastille pour 25 ml de tampon d′extraction. Les pastilles peuvent être ajoutées directement au milieu d'extraction. Il est également possible de préparer une solution mère (concentrée 25X).

Préparation de la solution mère (conc. 25X) :

Dissoudre une pastille cOmplete sans EDTA dans 2 ml d'eau distillée ou 2 ml de tampon phosphate 100 mM à pH 7,0.
Conditions de stockage (solution de travail) : La solution mère peut être stockée 1 à 2 semaines entre 2 et 8 °C et au moins 12 semaines entre -15 et -25 °C.

Soluble dans les tampons aqueux ou à ajouter directement au milieu d'extraction. Sinon, préparer une solution mère concentrée 25x dans 2 ml d'eau ou de tampon phosphate 100 mM à pH 7,0. La solution mère est stable 1 à 2 semaines entre 2 et 8 °C et au moins 12 semaines entre -15 et -25 °C, et peut être utilisée dans les solutions à base de thiols entre 15 et 25 °C.

À conserver entre 2 et 8 °C (un stockage entre -15 et -25 °C est également possible).

cOmplete is a trademark of Roche