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A propos de cet article
UNSPSC Code:
41106618
NACRES:
NA.54
Service technique
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sufficient for 40 reactions (DNA ligation)
manufacturer/tradename
Roche
storage temp.
−20°C
Quality Level
Catégories apparentées
Application
Le Kit de ligature rapide d′ADN relie de manière covalente des fragments d′ADN à extrémités franches ou cohésives, par exemple, en vue :
- D′un clonage dans des vecteurs de type plasmide ou phage.
- De l′ajout de séquences de liaison à des plasmides ou d′autres ADN.
- De la recircularisation d′un ADN linéaire.
Biochem/physiol Actions
ADN à extrémités franches ou cohésives (≤ 200 ng).
Inactivation à la chaleur : 10 min à 65 °C (ligase T4)
L′inactivation de la ligase T4 n′est nécessaire que si le mélange réactionnel de ligature doit être utilisé dans des expériences autres que des essais de transformation.
Remarque : L′inactivation par la chaleur du mélange réactionnel de ligature avant transformation provoque une chute drastique du nombre de colonies transformées (> facteur 20).
Activité en étoile : Il est recommandé d′éviter également les activités en étoile. En cas de doubles digestions par des enzymes prédisposées à une activité en étoile, consulter le Poster Roche sur les enzymes de restriction (ou le catalogue de Roche Applied Science) afin de choisir le tampon optimal pour une combinaison d′enzymes donnée. Dans la mesure du possible, utiliser le Tampon H pour les doubles digestions.
Inactivation à la chaleur : 10 min à 65 °C (ligase T4)
L′inactivation de la ligase T4 n′est nécessaire que si le mélange réactionnel de ligature doit être utilisé dans des expériences autres que des essais de transformation.
Remarque : L′inactivation par la chaleur du mélange réactionnel de ligature avant transformation provoque une chute drastique du nombre de colonies transformées (> facteur 20).
Activité en étoile : Il est recommandé d′éviter également les activités en étoile. En cas de doubles digestions par des enzymes prédisposées à une activité en étoile, consulter le Poster Roche sur les enzymes de restriction (ou le catalogue de Roche Applied Science) afin de choisir le tampon optimal pour une combinaison d′enzymes donnée. Dans la mesure du possible, utiliser le Tampon H pour les doubles digestions.
Features and Benefits
- Rapide : la ligature ne prend que 5 minutes.
- Pratique : la ligature est réalisée entre +15 °C et +25 °C.
- Facile : le kit contient tous les tampons et toutes les enzymes nécessaires.
- Flexible : le kit convient à toutes les réactions de ligature courantes.
- Fiable : la procédure simple et les réactifs prêts à l′emploi garantissent précision et reproductibilité.
General description
Le Kit de ligature rapide d′ADN contient tous les réactifs nécessaires à la ligature. Aucun autre réactif ou additif n′est requis. Le kit permet de ligaturer rapidement de l′ADN à extrémités franches ou cohésives à une température de +15 à +25 °C. En fonction de la concentration en ADN de la réaction, les produits de ligature sont soit circulaires (en cas de faible concentration d′ADN) soit concatémériques (pour une concentration d′ADN élevée). L′ADN ligaturé peut être utilisé directement dans des expériences de transformation.
Remarque : Une électroporation peut être réalisée après la ligature, conjointement avec le Kit de purification de produit de PCR High Pure®.
Remarque : Une électroporation peut être réalisée après la ligature, conjointement avec le Kit de purification de produit de PCR High Pure®.
Other Notes
Le nouveau Kit de déphos. et de ligature rapides d′ADN contient tous les réactifs du Kit de ligature rapide d′ADN, plus notre nouvelle phosphatase alcaline rAPid.
Packaging
1 kit constitué de 3 éléments.
Preparation Note
Temps d′incubation : 5 minutes
Rapport molaire de l′ADN à ligaturer : Le rapport molaire entre l′ADN vecteur et l′insert d′ADN dans la réaction de ligature standard est normalement de 1/3. Néanmoins, d′autres rapports peuvent être utilisés si cela est approprié. Par exemple :
Si les deux ADN ont des longueurs très différentes, essayer un rapport de 1/1 ou 1/2.
Si les extrémités des deux ADN sont franches, tenter un rapport de 1/5.
Rapport molaire de l′ADN à ligaturer : Le rapport molaire entre l′ADN vecteur et l′insert d′ADN dans la réaction de ligature standard est normalement de 1/3. Néanmoins, d′autres rapports peuvent être utilisés si cela est approprié. Par exemple :
Si les deux ADN ont des longueurs très différentes, essayer un rapport de 1/1 ou 1/2.
Si les extrémités des deux ADN sont franches, tenter un rapport de 1/5.
Legal Information
High Pure is a registered trademark of Roche
Composants de kit seuls
Réf. du produit
Description
- Dilution Buffer 5x concentrated
- T4 DNA Ligation Buffer 2x concentrated
- T4 DNA Ligase 5 U/μl
Classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
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Antibodies, 6(3), 11-11 (2017)
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