Kit de synthèse de sondes de PCR DIG

Ce kit de synthèse de sondes de PCR DIG contient une formulation de digoxigénine-11-désoxyuridine-triphosphate (DIG-11dUTP) labile en milieu basique. Ce kit permet de produire, de manière simple et efficace, des sondes d'ADN marquées à la digoxigénine qui sont hautement sensibles en PCR. Les sondes sont marquées au DIG-11dUTP (labile en milieu basique) par la technique de PCR. Le rapport DIG-dUTP:dTTP est de 1:2.
Ce kit de synthèse de sondes de PCR DIG contient le mélange d'ADN polymérases Expand High Fidelity. Cet excellent mélange d'enzymes à activité correctrice polymérise les sondes de 40 pb à 5 kb de long avec 10 pg d'ADN plasmidique ou 10 ng d'ADN génomique comme matrice. Les sondes marquées à la digoxigénine sont stables pendant plus d'un an.

Les sondes d'ADN marquées à la digoxigénine (DIG) produites avec le kit de synthèse de sondes de PCR DIG peuvent être utilisées pour détecter des gènes d'ARNm rare présents en un petit nombre de copies (ou en copie unique) dans des analyses par southern blot et northern blot. Ces sondes d'ADN marquées à la DIG ont également été utilisées pour marquer de l'ADN en hybridation in situ.
La concentration du mélange de nucléotides dUTP fourni peut être ajustée en fonction de la longueur de la sonde. L'efficacité du marquage peut être rapidement déterminée sur un gel d'agarose.
Les membranes peuvent subir plusieurs déshybridations et réhybridations successives, conformément au protocole décrit dans la notice.
Une réaction de marquage par PCR (50 μl) produit en général suffisamment de sondes pour 20 ml de solution d'hybridation. Ce kit permet de réaliser environ 25 réactions (de 50 μl).

1 kit contenant 6 composants

Chaque lot de kits de synthèse de sondes de PCR DIG est soumis à un contrôle fonctionnel par PCR. Les produits d'amplification sont analysés par southern blot d'ADN génomique.
Dans les conditions de PCR décrites dans la notice du produit, la réaction témoin donne un produit d'amplification de 442 pb. Étant donné que de multiples incorporations de DIG-dUTP se produisent au cours de la PCR, les produits de la PCR ont un poids moléculaire beaucoup plus élevé que le produit de PCR non marqué. Un profil de fragments spécifique est détecté après l'hybridation du produit de PCR sur 10 μg d'ADN génomique humain suivie d'une détection par chimioluminescence.