Test ELISA (colorimétrique) de prolifération cellulaire avec BrdU

Immuno-essai colorimétrique pour la quantification de la prolifération cellulaire, basé sur la mesure de l'incorporation de BrdU durant la synthèse de l'ADN :  alternative non radioactive au test par incorporation de [³H]-thymidine.

Produit réservé aux activités de recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Le Test ELISA (colorimétrique) de prolifération cellulaire avec BrdU est un kit de mesure de la synthèse d'ADN de seconde génération (performances améliorées). C'est une alternative colorimétrique simple, rapide et précise pour quantifier la prolifération cellulaire, reposant sur la mesure de l'incorporation de BrdU durant la synthèse d'ADN dans les cellules (proliférantes) en réplication. De ce fait, le Test ELISA de prolifération cellulaire peut être utilisé dans de nombreux systèmes d'analyse cellulaire in vitro différents. Par exemple :

• Détection et quantification de la prolifération cellulaire induite par les facteurs de croissance et les cytokines.
• Détermination des effets d'inhibition ou de stimulation de diverses substances sur la prolifération cellulaire en recherche environnementale et biomédicale, ainsi que dans les industries agroalimentaire, cosmétique et pharmaceutique.
• Mesure de l'immunoréactivité de lymphocytes stimulés par des mitogènes ou des antigènes.
• Analyse de la chimiosensibilité de cellules tumorales à différents médicaments cytostatiques en recherche médicale.
• Évaluation de la biocompatibilité de divers supports de croissance de cellules osseuses employés en ingénierie ostéo-tissulaire.

L'anticorps conjugué réagit avec la 5-bromo-2′-désoxyuridine (BrdU), un analogue de la thymidine, et avec la BrdU incorporée à l'ADN. Pour pouvoir se fixer à la BrdU intégrée à l'ADN, l'ADN marqué à la BrdU doit être dénaturé. L'anticorps ne donne lieu à aucune réaction croisée avec les constituants cellulaires endogènes tels que la thymidine, l'uridine ou l'ADN.

1 kit contenant 6 composants

Il est recommandé d'utiliser comme solution de travail pour l'anticorps une solution saline tamponnée au phosphate contenant 1 % de BSA à pH 7,4.

Concentration de travail : L'anticorps (anti-BrdU-peroxydase) utilisé dans le kit présente une concentration de 7,5 U/ml après reconstitution et de 0,075 U/ml après dilution. Vous pouvez également remplacer l'anticorps du kit par les fragments Fab d'un anticorps anti-BrdU. Cet anticorps étant doublement concentré, vous devez le diluer au 1/200e après reconstitution dans 1 ml.
Solution de travail : Solution de marquage au BrdU

Diluer le réactif de marquage au BrdU au 1/100ème avec du milieu de culture stérile (concentration obtenue : BrdU 100 μM).
Pour une microplaque à 96 puits, ajouter 1 ml de solution de marquage au BrdU pour des cellules cultivées dans 100 μl/puits (10 μl/puits) et 2 ml de solution de marquage au BrdU pour des cellules cultivées dans 200 μl/puits (20 μl/puits).

Solution mère d'anticorps anti-BrdU-peroxydase

Dissoudre l'anticorps anti-BrdU-peroxydase dans 1,1 ml d'eau bidistillée pendant 10 minutes puis bien homogénéiser.

Solution de travail d'anticorps anti-BrdU-peroxydase

Diluer la solution mère d'anticorps anti-BrdU-peroxydase au 1/100e avec la solution de dilution d'anticorps. Pour une microplaque à 96 puits, diluer 100 μl de solution mère d'anticorps anti-BrdU-peroxydase dans 10 ml de solution de dilution d'anticorps

Solution de lavage

Diluer le tampon concentré de lavage au 1/10ème avec de l'eau bidistillée.
Pour une microplaque à 96 puits, diluer 10 ml de tampon concentré de lavage avec 90 ml d'eau bidistillée.
Conditions de stockage (solution de travail) : Solution de marquage au BrdU
Réactif de marquage au BrdU non dilué (x 1 000) : entre 2 et 8 °C à l'abri de la lumière pendant plusieurs mois.
Réactif de marquage au BrdU dilué : stable plusieurs semaines entre 2 et 8 °C. Conserver à l'abri de la lumière. En cas de stockage à long terme, il est recommandé de conserver la solution de marquage au BrdU entre -15 et -25 °C sous forme d'aliquotes.
Solution mère d'anticorps anti-BrdU-peroxydase
Plusieurs mois entre 2 et 8 °C. En cas de stockage à long terme, il est recommandé de conserver la solution entre -15 et -25 °C sous forme d'aliquotes.
Solution de travail d'anticorps anti-BrdU-peroxydase
Préparer juste avant emploi. Ne pas stocker.
Solution de lavage
Plusieurs semaines entre 2 et 8 °C.

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.