Collagénase B

La collagénase Roche issue de Clostridium a servi à la préparation de cellules de nombreux type de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des îlots de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l′enzyme à s′attaquer à un tissu particulier.
La collagénase B a été utilisée pour préparer des cellules d′aorte de souris et de tissus de cancer colorectal.

La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes de type trypsine et les protéases neutres dégradent également d′autres protéines.

Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d′enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et protéase neutre.
La collagénase B présente une activité collagénase normale à élevée et une activité clostripaïne plus haute que la moyenne (généralement > 10 U/mg).

Inhibiteurs :
Inhibiteurs de collagénases : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n′est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d′œuf, soja), sérum

La collagénase B est préparée à partir de cultures de Clostridium histolyticum par filtration, précipitation au sulfate d′ammonium, dialyse et lyophilisation. La collagénase issue de Clostridium histolyticum est une enzyme collagénolytique. Elle interagit avec des substances ressemblant au collagène et est responsable de la dégradation du collagène en peptides de petite taille. Elle est largement utilisée pour désagréger de nombreux types de tissus (poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, par exemple) et pour préparer des suspensions unicellulaires destinées à la mise en place de systèmes de culture de cellules primaires. Il est recommandé d′utiliser la collagénase B lorsque le rendement et la viabilité revêtent un caractère critique.

L′activité de la collagénase fournie par Roche est exprimée en unités de Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec le substrat de Wünsch).
Les activités collagénasessont souvent exprimées en unités de Mandl (1 μmol de leucine libérée à partir de collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement, il n′existe pas de facteur de conversion constant entre ces deux unités d′activité, car l′unité de Mandl est en partie dépendante de la concentration de protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, ce qui constitue une variable non définie. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Activateur : Ca²⁺
Concentration de travail : 0,5 à 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu′à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l′activité diminue après reconstitution.

Reconstitution dans n′importe quelle solution saline équilibrée (HBSS par exemple).