Mélange maître FastStart Universal Probe (avec ROX™)

Ce produit est un mélange réactionnel à démarrage à chaud universel prêt à l'emploi qui permet de réaliser des qPCR et des RT-qPCR sur tous les appareils de PCR en temps réel nécessitant une normalisation au colorant ROX.

Le mélange maître FastStart^™ Universal Probe (avec ROX) inclut un nouveau colorant de référence qui permet son utilisation sur tous les appareils de PCR en temps réel nécessitant une normalisation au ROX, sans aucun ajustement ou modification de l'instrument ou du protocole. Ce mélange maître prêt à l'emploi concentré 2 × contient tous les réactifs requis (hormis les amorces, la sonde et la matrice) pour la détection quantitative en temps réel d'ADN, notamment par qPCR et qRT-PCR en deux étapes, dans un format de détection par sonde d'hydrolyse. Le mélange maître FastStart^™ Universal Probe (avec ROX) donne d'excellents résultats sur des appareils comme le système rapide de PCR en temps réel 7900 HT ou le système de PCR en temps réel 7500 d'Applied Biosystems. Il n'est pas destiné à être utilisé avec les appareils LightCycler^®.

Les protocoles à démarrage à chaud améliorent significativement la spécificité, la sensibilité et le rendement des PCR. La présence de groupements bloquants thermolabiles sur certains résidus d'acides aminés de la Taq ADN polymérase FastStart^™ inactive l'enzyme modifiée à température ambiante. Il ne se produit donc aucune élongation pendant la période où les amorces peuvent se lier de manière non spécifique. La suppression des groupements bloquants à haute température (étape de préincubation à +95 °C) active la Taq ADN polymérase FastStart^™.

Le mélange maître FastStart^™ Universal Probe (avec ROX) a été utilisé dans les applications suivantes :

• PCR quantitatives en temps réel (qRT-PCR) TaqMan^® pour la quantification de micro-ARN endogènes tels que MIR376B, MIR376A et MIR181A
• PCR après transcription inverse (RT-PCR) pour l'étude de l'expression du facteur de nécrose tumorale (TNF) dans la globalité des tissus synoviaux de patients atteints d'arthrite inflammatoire périphérique non différenciée (UPIA)
• amplification et détection de tout ADN ou ADNc cible, y compris ceux riches en GC ou en AT, par PCR quantitative

Pour d'excellents résultats en qRT-PCR en deux étapes, utiliser ce mélange maître avec le kit de synthèse de premier brin d'ADNc (Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit) de Roche.

• Améliorez la sensibilité et la spécificité des analyses par qPCR

Obtenez des valeurs de seuil du cycle (Ct) plus basses

• Utilisez le mélange réactif avec n′importe quel essai à base de sonde.

Obtenez des résultats sensibles et spécifiques dans les essais utilisant les sondes de la Universal ProbeLibrary ou toute autre sonde d′hydrolyse.

• Amplifiez et détectez un vaste éventail de cibles d′ADN ou d′ADNc

Amplifiez des fragments d′une longueur maximale de 500 pb, y compris les fragments riches en GC ou en AT.

• Visualisez les produits de l′amplification sur des gels d′agarose

• Utilisez des stations de pipetage robotiques pour la préparation des réactions de qPCR.

Utilisez un mélange maître stable à température ambiante pendant les temps de préparation prolongés des réactions.

• Évitez les résultats faux positifs provenant de la contamination par transfert.

Utilisez ce mélange contenant de la dUTP en présence d′uracile-ADN glycosylase pour éliminer l′ADN contaminant provenant de réactions de PCR antérieures.

Contrôle fonctionnel : La performance de chaque lot est testée en réalisant des réactions de qPCR à partir de trois matrices : une riche en GC, une riche en AT, et une longue (environ 440 pb).

Mélange maître FastStart Universal Probe (avec ROX), concentré 2x, contenant l′ADN Taq polymérase FastStart, le tampon de réaction, les nucléotides (dATP, dCTP, dGTP, dUTP) et un colorant de référence.

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

FastStart is a trademark of Roche

LightCycler is a registered trademark of Roche

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.