Pepstatine A

Inhibiteur puissant des protéases acides, notamment la pepsine, la rénine et la cathepsine D et de nombreuses protéases aspartiques microbiennes. Concentration efficace 1 μM. Stable pendant environ 1 jour.

La pepstatine A est un inhibiteur des protéases acides (aspartyl peptidases). Elle forme un complexe 1:1 avec des protéases telles que la pepsine, la rénine, la cathepsine D, la chymosine bovine et la protéase B (Aspergillus niger). L'inhibiteur est très sélectif et n'inhibe pas les protéases à thiol, les protéases neutres ou les protéases à sérine. La γ-secrétase solubilisée et la protéase rétrovirale sont également inhibées par la pepstatine A. Elle a été utilisée pour caractériser les protéases de plusieurs sources.

La pepstatine peut être dissoute à 1 mg/ml dans de l'acide acétique à 10 % (v/v) dans du méthanol (9:1 méthanol:acide acétique). L'inclusion d'acide acétique peut être nécessaire pour dissoudre ce peptide dans le méthanol ou le DMSO. Elle a été dissoute à 1 à 2 mg/ml dans l'éthanol, mais la chaleur peut être nécessaire pour une dissolution complète. Les solutions de pepstatine A peuvent être chauffées jusqu'à 60 °C sans que le peptide ne se décompose.
Les solutions mères à 1 mg/ml sont stables pendant au moins une semaine à 4 °C. Une solution à 1 mM dans du méthanol ou du DMSO est stable pendant des mois à -20 °C. Si les solutions deviennent jaune plus foncé, c′est que le réactif s'hydrolyse.
Une concentration de travail de 1 μM est stable pendant au moins un jour à température ambiante.

Pepstatin A is suitable for use:

• in the inhibitor cocktail in fluorometric matrix metalloproteinase assay
• as a protease inhibitor during homogenization of tissue
• as a protease inhibitor during extraction of cells
• to determine the molar concentrations of cathepsin D by titration with pepstatin A
• in inhibiting cathepsin D

It can be used in conjunction with E64-d and Leupeptin A to inhibit the degradation of autophagic cargo inside autophagosomes. For this application, the working concentration is typically between 1-10 μM.

1 U corresponds to the amount of inhibitor which reduces the activity of pepsin by 1 U (1 U corresponds to the amount of enzyme which increases the absorbance at 280 nm by 0.001 per minute at pH 2.0 and 37°C (Hemoglobin, Cat. No. 51290, as substrate, in an endvolume of 16 ml)); 10′000 absorbance-U as described above are equivalent to ∼1 Bergmeyer-U (when 1 pepsin-U is the amount of enzyme which hydrolyzes 1 μmol acetyl-L-phenylalanyl-3,5-diiodo-L-tyrosin per minute at pH 2.0 and 37°C)

Strong inhibitor of acid proteases - pepsin, cathepsin D, renin