Collagénase from Clostridium histolyticum

Clostridium histolyticum est un clostridium pathogène qui produit de la collagénase. Il s′agit d′un mélange enzymatique contenant de la collagénase, des protéases non spécifiques et de la clostripaïne.

La collagénase peut être utilisée :

• Dans la préparation de tissu artériel pour l′étude des produits finaux de glycosylation avancée (AGE).
• En association avec d′autres protéases, pour la désagrégation de tissus de tumeur humaine, de rein de souris, de cerveau humain, d′épithélium de poumon et de nombreux autres types.
• Dans des études de perfusion de foie et de rein, de digestion de pancréas et d′isolement d′hépatocytes non parenchymateux.
• Pour la préparation d′hépatocytes viables à partir de foie de rat et pour l′isolement d′adipocytes à partir de tissu adipeux de rat.

La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.

La collagénase est activée à l′aide de quatre grammes d′atomes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(β-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le β-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline. Les collagénases et la protéase neutre jouent un rôle important dans l′efficacité de la libération de cellules à partir d′un tissu. La collagénase reconnaît la séquence -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, où X est la plupart du temps un acide aminé neutre.

Les solutions sont habituellement préparées à une concentration de 1-2 mg/ml dans du tampon TESCA (TES 50 mM, chlorure de calcium 0,36 mM, pH 7,4 à 37 °C).
Ce produit présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.

Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.

Tel qu′il est livré, le produit est stable un an à -20 °C. Aucune perte de l′activité FALGPA ou protéase n′est observée au bout de 30 jours à 37 °C, 50 °C et -20 °C. Les solutions de collagénase brute sont stables lorsqu′elles sont congelées rapidement en aliquotes (à 10 mg/ml) et conservées à -20 °C. Tout cycle de congélation/décongélation supplémentaire détériore la solution. Le produit conserve 100 % de son activité pendant 7 heures lorsqu′il est placé sur de la glace.