Collagénase from Clostridium histolyticum

Ce produit a été utilisé pour isoler des lignées cellulaires PDAC (adénocarcinome canalaire pancréatique) et pour cultiver des fibroblastes pancréatiques.

La clostridiopeptidase A a été employée dans une étude décrivant une méthode quantitative pour évaluer de petites quantités de collagène, basée sur la spectrométrie de masse MALDI-TOF (désorption/ionisation laser assistée par matrice avec analyseur à temps de vol) après digestion du collagène.

La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.

La libération efficace de cellules à partir d'un tissu nécessite l'action de collagénases et de la protéase neutre. La collagénase est activée à l'aide de quatre atome-grammes de calcium (Ca²⁺) par mole d'enzyme. On pense que le filtrat de culture contient au moins 7 protéases différentes, de poids moléculaires allant de 68 à 130 kDa. Le pH optimal se situe entre 6,3 et 8,8. L'enzyme est typiquement utilisée pour digérer les constituants conjonctifs d'échantillons tissulaires afin de libérer des cellules individuelles. Le traitement par une collagénase peut provoquer la mort de certaines cellules. La digestion nécessite généralement des concentrations de 0,1 à 5 mg/ml. La durée de la réaction pour dissocier efficacement les cellules sans trop provoquer de mort cellulaire varie de 15 minutes à plusieurs heures. Utiliser de préférence un tampon de Krebs Ringer additionné de calcium et de BSA, et du Zn²⁺ pour l'activité.

Une solution mère peut être préparée en dissolvant 0,05-0,1 mg/ml de collagénase dans du tampon TESCA (TES 50 mM contenant du chlorure de calcium à 0,36 mM), pH 7,4 à 37 °C.

Présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.

Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.