Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

La DNase I est utilisée en première étape pour couper l′ADN en vue de l′incorporation de bases marquées dans l′ADN. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée dans la solution mère de nucléase avec la RNase lors de la préparation de lysats de la lignée cellulaire MDCK II (Madin-Darby canine kidney II). Elle a également été utilisée pour l′extraction de l′ARN de virus Sindbis.

La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée pour l′identification, la localisation et l′expression de deux nouveaux gènes humains similaires à la désoxyribonucléase I. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude évaluant une nouvelle approche pour obtenir une RNase, une DNase, une cholestérol estérase et une trypsine hautement actives à partir de pancréas de bovin.

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester situées à côté de pyrimidines et produit des polynucléotides comportant des 5′-phosphates terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d′ADN et les sites de clivage sont répartis au hasard. Les deux brins d′ADN sont clivés à peu près au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ activent l′enzyme. Une concentration de Ca²⁺ 5 mM permet de stabiliser l′enzyme vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase 1 de pancréas de bovin est composée de quatre éléments A, B, C et D, pouvant être distingués par chromatographie, dans des rapports molaires respectifs pour A, B et C de 4/1/1. D est présent en quantités très faibles. Il est bien connu que le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l′actine inhibent l′activité enzymatique.

Ce produit permet de couper et d'éliminer l'ADN présent dans les échantillons protéiques.

Une unité Kunitz provoque une variation de A₂₆₀ de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l′ADN de type I ou III.

Contient du chlorure de calcium

La poudre d′enzyme peut être reconstituée dans de l′eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l′exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu′elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d′activité peut être d′environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active jusqu′à cinq heures à 60 °C entre pH 5 et pH 7, et devient inactive après < 10 minutes à 68 °C. Sa perte d′activité est de 6 %/heure dans un tampon d′acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.