DUO92014
Réactifs de détection in situ Duolink® vert
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A propos de cet article
NACRES:
NA.32
UNSPSC Code:
12352200
Service technique
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Duolink®
technique(s)
proximity ligation assay: suitable
fluorescence
λex 495 nm; λem 527 nm (green) (FITC (Cyanine 2), Zeiss Filter set 38)
suitability
suitable for fluorescence
shipped in
dry ice
storage temp.
−20°C
Quality Level
Application
L'essai de ligature de proximité (Proximity Ligation Assay, PLA®) Duolink® permet la détection endogène des interactions entre protéines, des modifications post-traductionnelles et du niveau d'expression des protéines au niveau monomoléculaire, sur des échantillons de tissus et de cellules fixés.
Les réactifs de détection in situ Duolink® ont été utilisés dans les essais de ligature de proximité suivants :
- vasopressine et hormone de libération des gonadotrophines (GnRH) sur des cryocoupes de cerveau de rat
- cellules embryonnaires de rein humain (HEK-293)
- tissus hypophysaires
Biochem/physiol Actions
Les réactifs de détection par fluorescence verte sont souvent utilisés avec un filtre FITC.
Features and Benefits
- Aucune surexpression ou manipulation génétique nécessaire
- Grande spécificité (moins de faux positifs)
- Sensibilité monomoléculaire grâce à l'amplification par cercle roulant
- Possibilité de quantification relative
- Aucun équipement spécifique requis
- Plus rapide et plus simple que la technique FRET
- Plus précis qu'une co-immunoprécipitation
- Résultats prêts à être publiés
General description
Les réactifs de détection in situ Duolink® par fluorescence verte contiennent tous les réactifs in situ Duolink nécessaires à l'amplification et à la détection des sondes PLA® liées. Les sondes de détection contiennent un fluorophore (lex = 495 nm et lem = 527 nm) qui peut être visualisé avec le même filtre que la Cy®2 ou l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les expériences menées à l'aide des réactifs in situ Duolink permettent la détection et la visualisation des interactions protéiques, du niveau d'expression des protéines et des modifications post-traductionnelles au niveau monomoléculaire sur des échantillons de tissus et de cellules fixés.
Other Notes
- 5x ligature - contient des oligonucléotides qui s′hybrident aux sondes PLA ainsi que tous les éléments nécessaires à la ligature, hormis la ligase
- 1x ligase (1 unité/μl)
- 1x polymérase (10 unités/μl)
- 5x amplification vert - contient tous les éléments nécessaires à l′amplification par cercle roulant (RCA), hormis la polymérase Contient également des sondes oligonucléotidiques marquées avec un fluorophore qui s′hybride au produit de RCA.
Éléments non inclus dans le kit de détection :
Anticorps primaires, sondes PLA, tampons de lavage, milieu de montage
Pour utiliser ce produit, suivez le protocole de fluorescence in situ Duolink®. Des instructions rapides sont également disponibles.
Consultez notre portail d'information sur les essais PLA Duolink® pour en savoir plus sur la réalisation d'une expérience Duolink®, les applications, la résolution des problèmes et bien plus encore.
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Preparation Note
Pour réaliser une expérience de PLA in situ Duolink® complète, vous avez besoin de deux anticorps primaires (validés par PLA, IHC, ICC ou IF) reconnaissant deux épitopes cibles. Il vous faut également une paire de sondes PLA de deux espèces différentes (une sonde positive et une sonde négative), des réactifs de détection, des tampons de lavage et du milieu de montage. Notez que les anticorps primaires doivent provenir de la même espèce que les sondes PLA Duolink®. L'analyse s'effectue sur un équipement de test d'immunofluorescence standard.
Stocker les composants à –20 °C. Les enzymes doivent être conservées au froid (–20 °C), sans rupture de la chaîne du froid ; utiliser un bloc de congélation après retrait du congélateur.
Legal Information
Cy is a registered trademark of Cytiva
Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
signalword
Danger
hcodes
pcodes
Hazard Classifications
Resp. Sens. 1
Classe de stockage
10 - Combustible liquids
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Instructions
Application Note
Using Duolink in Multiwell Plates
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