E-64

L'E-64 est un inhibiteur de protéases à cystéine qui a été isolé chez le champignon Aspergillus japonicus TPR-64. L'E-64 est également connu sous le nom de N-[N-(L-3-trans-carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-agmatine. L'E-64 inhibe efficacement plusieurs protéases à cystéine, en particulier :

• La cathepsine K
• La cathepsine L
• La cathepsine S

L'E-64 est également actif sur d'autres enzymes, par exemple :

• La calpaïne
• La cathepsine B
• La cathepsine H
• La papaïne

Le E-64 est un ligand efficace de purification par affinité des protéases à cystéine. Son couplage à une matrice d′affinité thiolée supprime l′irréversibilité de ses liaisons tout en conservant leur spécificité.

Inhibiteur irréversible efficace des protéases à cystéine qui n′affecte pas les résidus de cystéine d′autres enzymes et qui ne réagit pas avec les thiols de faible poids moléculaire tels que la calpaïne et la cathepsine B. Efficace à une concentration de 1 à 10 μM.

Le E-64 est un inhibiteur de protéases à cystéine irréversible, puissant et hautement sélectif. Il ne réagit pas avec le groupement thiol fonctionnel des enzymes autres que les protéases, telles que la L-lactate déshydrogénase ou la créatine kinase. Le E-64 n′inhibe pas les protéases à sérine (hormis la trypsine) comme d′autres inhibiteurs de protéases à cystéine, la leupeptine et l′antipaïne. Le groupement trans-époxysuccinyl (fraction active) du E-64 se fixe de manière irréversible au groupement thiol actif de nombreuses protéases à cystéine telles que la papaïne, l′actinidase et les cathepsines B, H et L pour former une liaison thioéther. Le E-64 est un inhibiteur de protéases à cystéine particulièrement utile dans les études in vivo du fait de son inhibition spécifique, de sa capacité à pénétrer dans les cellules et les tissus et de sa faible toxicité.

Le E-64 est soluble dans l′eau. Il est possible de préparer une solution à 20 mg/ml dans l′eau (avec chauffage éventuel). Une solution mère peut par exemple être réalisée sous forme de solution aqueuse 1 mM. L′inhibition des protéases est effective aux concentrations de 1 à10 μM. Les solutions mères en milieu aqueux sont stables plusieurs mois à -20 °C. Les solutions diluées sont stables plusieurs jours à pH neutre. Le E-64 est stable de pH 2 à pH 10, mais est instable dans l′ammoniac ou HCl. Le E-64 est également soluble dans le DMSO ; une solution 10 mM peut être préparée dans du DMSO sec et stockée à -20 °C. Les dilutions ultérieures peuvent être réalisées dans du milieu de culture. Des solutions pour injection ont été préparées en dissolvant du E-64 dans du chlorure de solution à 0,9 % ou dans une quantité minimale de solution saturée en bicarbonate de sodium puis par dilution avec du chlorure de solution à 0,9 % (après ajustement du pH à 7,0 avec de l′acide acétique).