Thiocyanate de guanidine

Le thiocyanate de guanidine, ou rhodanide de guanidinium, est un composé chimique polyvalent très utilisé dans la recherche en biologie moléculaire et en biochimie. Il se comporte comme un agent chaotropique et perturbe la membrane des cellules et des organites, ce qui facilite la lyse cellulaire et l'isolement des organites. Il sert notamment de puissant dénaturant des protéines, surpassant le chlorhydrate de guanidine sur les protéines en cours de dépliement. Cette propriété est particulièrement intéressante pour purifier les acides nucléiques provenant de lysats cellulaires bruts, séparant efficacement les acides nucléiques des protéines dénaturées.

Durant la purification des acides nucléiques, le thiocyanate de guanidine permet d'inactiver les DNases et RNases, empêchant la dégradation des acides nucléiques et garantissant un meilleur rendement. Sa double faculté à inhiber les enzymes et à dénaturer en fait un outil crucial pour les études sur l'ADN et l'ARN. Outre l'isolement d'acides nucléiques, le thiocyanate de guanidine permet de lyser les cellules et d'inactiver les particules virales durant les extractions d'ARN et d'ADN. Non seulement il perturbe les membranes, mais il dénature aussi les RNases et les DNases, protégeant ainsi de la dégradation enzymatique les acides nucléiques extraits. La polyvalence du thiocyanate de guanidine s'étend jusqu'aux techniques de biologie moléculaire comme la PCR, le northern blotting et le southern blotting. C'est un réactif vital de ces méthodes, où il contribue au succès de l'analyse et de l'amplification des acides nucléiques.

Agent chaotrope et dénaturant fort ; solubilise les cellules.

Le thiocyanate de guanidine a été utilisé :

• pour la lyse des cellules d′une lignée d′adénocarcinome colorectal avant d′isoler l′ARN
• comme inhibiteur de PCR dans des essais de qPCR triplex d′ADN mitochondrial (mtDNA)
• pour l′extraction d′ADN de liquide céphalorachidien (LCR)

Le thiocyanate de guanidine est un agent dénaturant utilisé de routine dans l′isolement de l′ARN. Il est employé comme tampon de stockage pour les échantillons de sang total. Le thiocyanate de guanidine inactive les nucléases et est idéal pour le stockage et la congélation des échantillons fécaux pour les analyses d′ADN. Il est utilisé avec le phénol−chloroforme pour l′extraction de l′ARN.

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