Concanavaline A from Canavalia ensiformis (Jack bean)

Detects glycoproteins containing α-D-mannose, α-D-glucose when used with appropriate peroxidase substrate

General Western Blot Protocol:

• Glycoprotein sample size: 500ng
• Lectin Concentration: 0.1ug/ml

1. Load samples at 500 ng of glycoprotein per lane
2. Run 4-20% Bis-Tris SDS page gel
3. Transfer gel to a PVDF membrane
4. Block membrane for 1 hr at RT with RIPA buffer (R0278 Sigma)
5. Incubate HRP lectin at 0.1ug/ml with RIPA buffer for 2 hours at RT
6. Wash membrane 5 x 5 minutes with 25ml RIPA buffer
7. Detect using chemiluminescent substrate (CPS1-120)

La Con A n′est pas spécifique au groupe sanguin, mais a une affinité pour les résidus terminaux α-D-mannosyle et α-D-glucosyle. Les ions Ca²⁺ et Mn²⁺ sont requis pour l′activité. La Con A se dissocie en dimères à un pH inférieur ou égal à 5,6. Entre pH 5,8 et pH 7,0, la Con A existe sous forme d′un tétramère ; au-dessus de pH 7,0, elle forme des agrégats d′ordre supérieur. Con A possède une activité mitogène, qui dépend de son degré d′agrégation. La succinylation produit une forme dimérique active qui reste dimérique à un pH supérieur à 5,6.

Package size based on protein content

Lyophilized powder containing tris-citrate buffer salts and trace calcium and manganese

Prepared from peroxidase type VI (P8375), using the method of Wilson and Nakane, which promotes conjugation but prevents the interaction between Con A and peroxidase sugar residues.

L′activité d′agglutination est exprimée en μg/ml et est déterminée à partir de dilutions en série dans un tampon phosphate salin de pH 6,8 contenant du Ca²⁺ et du Mn²⁺ à 1 mg par ml de solution. Cette activité est la concentration la plus faible nécessaire pour agglutiner une suspension d′érythrocytes humains à 2 % après 1 h d′incubation à 25 °C.

One unit will form 1 mg purpurogallin in 20 sec from pyrogallol at pH 6.0 at 20 °C.