Réactifs et substrats d'immunodétection

Réactifs de blocage

Le blocage des sites membranaires non liés empêche la liaison non spécifique des anticorps qui peut entraîner un bruit de fond élevé. Les bloqueurs traditionnels à base de lait, de gélatine et d'autres protéines sont efficaces pour de nombreuses applications de blotting, mais peuvent réduire la sensibilité ou la détection en masquant le signal ou en interférant avec la détection de cibles protéiques spécifiques.Les Immobilon^® réactifs de suppression du bruit de fond comprennent des tampons sans protéines, prêts à l'emploi, optimisés pour réduire les niveaux de bruit de fond lors de l'utilisation de la chimiluminescence, de la fluorescence ou de la détection des phosphoprotéines.

Streptavidine et conjugués-d'anticorps-secondaires

Les méthodes modernes d'immunodétection sont basées sur la détection par liaison enzymatique à l'aide de streptavidine ou d'anticorps secondaires liés de manière covalente à des enzymes telles que la peroxydase de raifort (HRP) ou la phosphatase alcaline (AP). L'enzyme conjuguée catalyse la dégradation de substrats spécifiques, ce qui génère un signal. Une variété de streptavidine, de protéine A, de protéine G et de conjugués d'anticorps secondaires sont disponibles pour le Western blotting. Nous offrons également une large sélection de substrats HRP et AP pour la détection chimiluminescente, chromogénique et chimifluorescente dans le Western blotting.

CHEMILUMINESCENT SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING

Immobilon^® Les substrats HRP pour la détection chimiluminescente offrent une sensibilité accrue pour des blots plus quantitatifs, réduisant les coûts en vous permettant de diminuer la concentration d'anticorps utilisée pour la détection.Choisissez parmi une gamme de substrats Immobilon® de différentes sensibilités dans des formats pratiques prêts à l'emploi ou à deux composants afin d'optimiser la détection pour votre application de Western blotting.

• Immobilon^® Classico, Crescendo et Forte Chemiluminescent substratescomprennent une famille de réactifs prémélangés, prêts à l'emploi, pour la détection à base de peroxydase, proposés dans une gamme de sensibilités permettant d'obtenir des rapports signal/arrière-plan optimaux pour toute une série de concentrations de protéines cibles.Limites de détection:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg de la protéine cible
  • Immobilon^® Crescendo : ~ 1-3 pg de la protéine cible
  • Immobilon^® Forte :~ 400 fg protéine cible
     
• Immobilon^® Western HRP, Immobilon^® ECL Ultra, et Immobilon^® UltraPlus Western offrent une sensibilité exceptionnelle et une longue durée de vie du signal dans des formats standard à 2 composants. Ces formulations permettent d'utiliser des solutions d'anticorps primaires plus diluées pour la détection en immunoblot. Limites de détection:
  • Immobilon^® Western HRP substrate : ~ 400 fg de protéine cible
  • Immobilon^® substrat ECL Ultra : faible gamme de femtogrammes
  • Immobilon^® ECL UltraPlus Western Blot HRP Substrate : faible gamme de femtogrammes

Sensibilité relative des substrats HRP chimiluminescents Immobilon^®

Cytiva™ Amersham™ Les réactifs de détection ECL utilisent une détection améliorée à base de luminol HRP avec différentes formulations disponibles pour couvrir différents besoins d'applications de Western blotting. 

• Cytiva Amersham™ ECL Western blotting detection reagents are recommended for confirmatory Western blotting applications.
• Cytiva Amersham™ ECL Prime, réactif de détection par Western blotting, permet de détecter les protéines très abondantes et peu abondantes sur le même blot.
• Cytiva Amersham™ ECL Select, réactif de détection par Western blotting, offre une sensibilité élevée, même en cas d'utilisation d'anticorps primaires et secondaires dilués.
• Cytiva Amersham™ ECL Start Western Blotting réactif de détection a été développé pour la détection par chimiluminescence des protéines de moyenne et haute expression.

CHROMOGENIC SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING

La détection chromogénique utilise une enzyme conjuguée à la peroxydase (par exemple HRP) ou à la phosphatase alcaline (AP) pour catalyser la réaction qui aboutit au dépôt d'un précipité coloré insoluble à des fins de détection, Nos substrats chromogènes pour le Western blotting sont disponibles sous forme de solution, de poudre et de comprimés afin d'offrir des options flexibles en matière de stockage et d'utilisation.

• SIGMAFAST™ DAB Tablets (substrat chromogène HRP)sont composées d'un substrat précipitant colorimétrique qui produit une couleur brune lors de la réaction avec la peroxydase de raifort et peuvent être dissoutes dans l'eau pour préparer une solution tamponnée prête à l'emploi pour la détection sur buvard.
• BCIP/NBT (bleu/violet) et BCIP/TNBT (bleu/brun) Single Reagent (substrats AP chromogènes) sont des substrats colorimétriques très sensibles pour la phosphatase alcaline.
• TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (substrat HRP chromogène) est un substrat colorimétrique à un seul composant qui produit un produit bleu foncé.

Signal Enhancers

• Immobilon^® Signal Enhancer est conçu pour être utilisé dans les applications de Western blotting lorsqu'une faible intensité de signal est observée. L'amélioration de la réaction anticorps-antigène peut produire une augmentation de 2 à 10 fois de l'intensité du signal. Immobilon^® Signal Enhancer est compatible avec les membranes PVDF et nitrocellulose et peut être utilisé avec des méthodes de détection chromogènes, chimiluminescentes et fluorescentes.
• SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit est conçu pour renforcer le signal chimiluminescent ou colorimétrique de la cible sur les membranes de nitrocellulose ou de PVDF

Réactifs et kits pour le stripping et le re-probing

Les réactifs de stripping et de re-probing sont spécialement formulés pour éliminer rapidement et efficacement les anticorps des Western blots sans affecter de manière significative les protéines immobilisées.

• Les réactifs ReBlot™ Plus décapent efficacement les blots sondés des anticorps liés. Les réactifs ReBlot™ Plus sont disponibles dans des formulations douces et fortes.