mPAGE® Lux Casting System pour les gels SDS-PAGE
mPAGE® Lux Système de coulée pour les gels de SDS-PAGE
Comment couler un gel pour le SDS-PAGE ? La coulée de gels implique généralement la coulée de gels de résolution et d'empilage dans un processus progressif qui prend du temps. Les chercheurs disposent traditionnellement de peu d'options pour répondre à leurs besoins en matière de coulée de gel et d'électrophorèse. Notre système innovant mPAGE® Lux SDS-PAGE Gel Casting System est conçu pour offrir la flexibilité des gels coulés à la main et la fiabilité des gels préfabriqués, sans perte de qualité, de temps ou de coût significativement plus élevé qui accompagnent les options alternatives. Des gels en moins de trois minutes avec notre système de coulée mPAGE® Lux. Vous pouvez dire adieu aux méthodes conventionnelles et à leurs étapes manuelles fastidieuses pour la création de gels. C'est tout frais.
Vue d'ensemble des sections
- mPAGE® Lux Casting System Features and Benefits
- Quelles sont les étapes de la coulée en gel ?
- mPAGE® Lux Casting System and Bis-Tris Reagent Kit
- mPAGE® Lux Casting System and Bis-Tris Reagent Kit
- mPAGE® Protocole de coulée de gel SDS-PAGE Lux
- mPAGE® ;Lux Bis-Tris Gels with MOPS and MES Running Buffers
- Coulée de gel durable avec mPAGE® ;Lux Casting System
- Commander le système de coulée mPAGE® Lux et les réactifs associés
mPAGE® Lux Caractéristiques et avantages du système de coulée
Le système de coulée mPAGE® Lux remplace votre processus de coulée de gel par des méthodes plus rapides, plus simples et plus sûres, avec des résultats plus reproductibles. Durcissez un mini gel en 90 secondes avec le système de coulée mPAGE® Lux par rapport aux méthodes conventionnelles qui prennent plus de 90 minutes. Notre flux de travail de coulée rapide avec irradiation UV accélère la polymérisation des réactifs Bis-Tris mPAGE® Lux, tandis que la chimie des gels Bis-Tris permet des temps d'exécution plus courts par rapport aux méthodes conventionnelles.
Pour améliorer encore la compatibilité et vos besoins en matière de flux de travail, nous proposons désormais notre masque à clipser mPAGE®. Avec le masque à clipser mPAGE®, les plaques courtes, les plaques d'écartement et les peignes Bio-Rad Mini-PROTEAN® ainsi que les plaques mPAGE® Mini Short Plates, Spacer Plates et Combs peuvent être utilisés lors du durcissement d'un gel à l'aide de la station de durcissement mPAGE® Lux.
Note : la plaque courte masquée mPAGE® Lux n'est plus nécessaire lorsque le masque à clipser est utilisé, bien que la plaque courte masquée puisse toujours être utilisée.
Flux de travail traditionnel pour les moulages manuels
Les plaques courtes masquées peuvent être utilisées lors de la polymérisation d'un gel à l'aide de la station de polymérisation mPAGE® Lux.
Figure 1.Infographie sur le flux de travail traditionnel pour les gels SDS-PAGE montrant les étapes étendues et le temps de polymérisation de 90 minutes ou plus.
mPAGE®Lux Workflow
Figure 2.Coulée de gel traditionnelle et flux de travail mPAGE® Lux. Le système de coulée mPAGE® Lux comporte moins d'étapes, réduit le temps de polymérisation et les déchets toxiques par rapport à la technologie traditionnelle de coulée de gel. Les gels créés par le système de coulée mPAGE® Lux sont compatibles avec le Mini-gel Tank mPAGE® et les cellules Mini-PROTEAN de Bio-Rad. Pour une résolution exceptionnelle et des temps d'exécution réduits, utilisez nos tampons mPAGE®. Les gels Lux sont compatibles avec les tampons et réactifs de coloration Bis-Tris.
Quelles sont les étapes de la coulée d'un gel ?
La coulée d'un gel SDS-PAGE comprend souvent la pesée, le prémélange des solutions de gel, la coulée et le temps d'attente pour la polymérisation. Bien qu'elles soient souvent considérées comme une solution plus économique, les méthodes conventionnelles de coulée de gel à la main prennent beaucoup de temps et nécessitent de nombreuses étapes pratiques qui peuvent donner lieu à des formulations de gel incohérentes. La qualité des gels coulés à la main et les données qu'ils peuvent contribuer à générer dépendent de la cohérence de la formulation, de sorte que des réactifs et un temps précieux ne soient pas gaspillés en raison de l'échec des gels.
Figure 3.Comparaison de la qualité des données avec le gel mPAGE® Lux Bis-Tris et le gel tris-glycine coulé à la main. Qualité des bandes du gel mPAGE® Lux Bis-Tris (à gauche) par rapport au gel tris-glycine coulé à la main (à droite). Les deux gels sont à 10 % d'acrylamide et chargés d'un titrage de lysat de cellules humaines A431. La durée de l'électrophorèse est de 42 minutes à 200V (gel de Lux) et de 119 minutes à 120V (gel de tris-glycine). Les gels sont colorés avec le colorant ReadyBlue™ Coomassie.
Figure 4.Comparaison des méthodes de transfert humide, rapide et semi-sèche par Western blotting. Les comparaisons ont été effectuées à l'aide de gels Bis-Tris mPAGE® Lux à 12 %, avec un titrage de lysat de cellules humaines A431 et diverses méthodes de transfert sur des membranes Immobilon®-P. Les membranes ont été taguées avec des anticorps anti-EGFR et anti-ErK1/2, puis détectées avec Immobilon®. Les membranes ont été recouvertes d'anticorps anti-EGFR et anti-ErK1/2, puis détectées avec le substrat HRP ECL Ultra Western d'Immobilon®. Méthode Turbo = transfert à l'aide du système de transfert Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™ et des paquets de transfert Trans-Blot® Turbo™.
Figure 5. Reproductibilité des gels mPAGE® Lux Bis-Tris. A. Quatre gels à 8 % ont été coulés et exécutés avec un titrage de lysat de cellules humaines A341 ensuite coloré avec le colorant de gel ReadyBlue™ Coomassie. B. La distance de migration relative (Rf) pour le marqueur de poids moléculaire non coloré a été calculée pour chaque gel. L'écart-type est indiqué pour chaque bande de protéine.
Figure 6.Analyse de la durée de conservation des réactifs mPAGE® Lux Bis-Tris. Gels mPAGE® Lux Bis-Tris coulés en utilisant des réactifs (A) 0 mois, (B) 6 mois, ou (C) 12 mois, ou (D) 24 mois. Aucune différence n'est observée au niveau de l'allure ou de la durée de la course.
mPAGE® Lux< /span>./span> et kits de réactifs Bis-Tris
Ajoutez le système de coulée mPAGE® Lux à votre laboratoire et vous obtiendrez des gels prêts à l'emploi en moins de 3 minutes. Respirez et habituez-vous à un processus de coulée de gels rapide avec moins de déchets et sans crainte d'échec. C'est tout frais. Nos kits du système de coulée mPAGE® Lux comprennent la station de polymérisation mPAGE® Lux, le tube de mélange mPAGE® Lux, le dispositif de coulée de gel mPAGE®, le dispositif de coulée de gel mPAGE®, le dispositif de coulée de gel mPAGE®. Gel Caster, mPAGE® Comb avec 10 puits et 15 puits, mPAGE® Mini Spacer Plate, mPAGE® Lux Masked Short Plates avec 10 puits et 15 puits. Pour le système de coulée mPAGE® Lux d'une épaisseur de 0,75 mm, le peigne de 15 puits et les plaques courtes masquées ne sont pas inclus. Les descriptions et configurations des kits sont les suivantes:
Figure 7.Station de polymérisation mPAGE® Lux.
La solution de solubilisation, le diluant et la solution d'empilage.
mPAGE® L.span class="h2-lowercase">ux Protocole de coulée des gels de SDS-PAGE
Toutes les solutions doivent être protégées de la lumière du soleil pour éviter la polymérisation. Avant de couler les gels, amener toutes les solutions à température ambiante.
Gel de résolution
- Préparer la solution de gel de résolution en mélangeant la solution de résolution et le diluant. Voir le tableau ci-dessous pour les volumes de mélange. La solution de gel de dissolution peut être préparée dans un grand lot pour faire plusieurs gels séquentiellement.
- A l'aide d'une pipette propre, ajouter la solution de dissolution dans un tube de mélange noir ou un autre récipient opaque.
- A l'aide d'une pipette propre, ajouter le diluant dans le même tube de mélange.
- Mélanger en tournant doucement le récipient d'un côté à l'autre. Ne pas agiter.
Volumes de solution de gel de résolution
Utiliser les volumes ci-dessous pour réaliser un seul gel de 1,0 mm. Pour les volumes de solution de 0,75 mm et 1,5 mm, voir le guide d'utilisation complet disponible sur la page du produit à SigmaAldrich.com.
Les volumes de solution de gel de dissolution sont les suivants
Gel d'empilage
La solution d'empilage est prête à l'emploi directement à partir du flacon. Utiliser 1,5 ml de solution d'empilage pour un gel de 1,0 mm. Important : Ne pas diluer la solution d'empilage.
Coulée de gel
- Nettoyer les plaques de verre avec un détergent doux et les rincer à l'eau DI. Essuyer avec de l'éthanol à 70 % avant utilisation.
- Assembler le dispositif de coulée de gel mPAGE® à l'aide de la plaque d'écartement mPAGE® et de la plaque courte masquée mPAGE® Lux pour former une cassette en verre. La plaque courte masquée doit être orientée avec le texte sur le côté gauche de la cassette. S'assurer que les deux plaques de verre sont alignées au bas du cadre de la roulette avant de fermer les pinces de la roulette. Remarque : la plaque courte masquée mPAGE® Lux doit être utilisée avec la station de polymérisation mPAGE®.
- Mettre sous tension la station de polymérisation mPAGE® Lux en appuyant sur le bouton d'alimentation. La station de polymérisation lance un auto-test. Une fois l'autotest terminé, l'écran prêt s'affiche.
- Ouvrir la porte et placer la roulette de gel dans la station de polymérisation, en alignant la roulette derrière les pare-chocs.
- A l'aide d'une pipette propre de 5 ml, ajouter la solution de gel de résolution préparée jusqu'à la ligne de remplissage indiquée sur le cadre de la roulette de gel mPAGE®.
- A l'aide d'une pipette propre de 5 ml, ajouter lentement la solution d'empilage jusqu'au sommet de la plaque courte.
- Insérer lentement le peigne mPAGE® à un angle pour éviter la formation de bulles d'air sous les dents. Important : le mélange de différents formats de puits peut entraîner une mauvaise formation des puits. Utiliser :
- Les peignes de 10 puits avec les plaques courtes masquées mPAGE® Lux de 10 puits
- Les peignes de 15 puits avec les plaques courtes masquées mPAGE® Lux de 15 puits
- Les peignes de 15 puits avec les plaques courtes masquées mPAGE® Lux de 15 puits./sup> Lux
- Essuyer les débordements de solution à l'avant de la plaque courte pour éviter une polymérisation incomplète là où il y a débordement.
- Installer le masque à clipser sur la plaque courte et le cadre de coulée.
- L'avant du masque doit être bien ajusté contre la plaque courte, couvrant complètement les dents du peigne.
- Fermer la porte de la station de polymérisation et sélectionner l'épaisseur du gel.
- Appuyer sur Start pour commencer la polymérisation du gel. Conseil : si vous coulez plusieurs gels, commencez le processus de coulée du gel avec le deuxième Gel Caster maintenant, pendant que le premier gel durcit.
- Une fois le durcissement terminé, ouvrez la porte et retirez le Gel Caster. Retirez la cassette du Gel Caster en abaissant le clip de tension pour libérer le cadre de la roulette. Ensuite, ouvrez les côtés du cadre et faites glisser la cassette par le haut.
- Utilisez le gel immédiatement ou enveloppez la cassette dans une serviette en papier humide et conservez-la à plat dans un sac à fermeture éclair ou un autre récipient hermétique à une température de 2 à 8 °C pendant 2 semaines maximum. Ne pas laisser les cassettes sans emballage car le gel se dessèche.
mPAGE® Lux
mPAGE® Lux Bis-Tris Gels avec des tampons d'exécution MOPS et MES.
PAGE® Lux Bis-Tris Gels with MOPS and MES Running Buffers
MAGE® Lux Bis-Tris Gels are designed to work exclusively with MOPS or MES running buffer. Selon le tampon de fonctionnement utilisé, il est possible d'obtenir des schémas de séparation très distincts. Le tampon MOPS peut être utilisé pour affiner la séparation des protéines de grande et moyenne taille, tandis que le tampon MES permet une séparation optimale des protéines plus petites. Reportez-vous aux tableaux de migration (Figure 8) pour déterminer quel système de tampon de gélose est le mieux adapté à la gamme de séparation envisagée.
Figure 8.Graphiques de migration des gels mPAGE® Lux Bis-Tris avec le tampon d'exécution MOPS SDS et le tampon d'exécution MES SDS (kDa).
Comment retirer le gel après l'électrophorèse
Retirer le gel de la cassette en verre à l'aide d'un grattoir à gel. Couper le long des bords du gel (à droite) pour éviter de déchirer le gel. Les gels mPAGE® Lux Bis-Tris doivent UNIQUEMENT être utilisés avec le tampon d'exécution MOPS-SDS ou MES-SDS. Les gels Bis-Tris ne sont PAS compatibles avec le tampon d'exécution Tris-Glycine.
Coulée de gel durable avec mPAGE® Lux ;Gel Casting System
Pour quantifier les impacts durables de notre système de coulée mPAGE® Lux, des calculs ont été effectués par rapport à l'utilisation d'un kit de coulée rapide représentatif pour la coulée manuelle de gels de polyacrylamide pour l'électrophorèse des protéines. Les deux systèmes nécessitent l'utilisation de kits de coulée réutilisables et de kits de réactifs pour la coulée manuelle. Le système de coulée mPAGE® Lux nécessite en outre l'utilisation de la station de polymérisation de gel mPAGE® Lux, tandis que le système de base nécessite l'utilisation d'APS & ; TEMED, qui sont vendus séparément du kit de réactifs de coulée à la main.
Tous les composants nécessaires à la coulée des gels d'électrophorèse pendant la durée de vie minimale de la station de polymérisation mPAGE® Lux, qui est de 5 ans, sont pris en compte dans cette évaluation. Cela comprend la production, l'emballage, la distribution, l'utilisation et la fin de vie du kit de moulage manuel, des réactifs nécessaires et de tout le matériel de laboratoire consommable requis. Les calculs ont été effectués en supposant que 250, 500 ou 1000 gels étaient produits par an et la différence minimale par rapport au système de base a été revendiquée.
Attributs de durabilité des matériaux et des produits
Bien qu'il s'agisse d'une solution de flux de travail innovante pour la coulée manuelle de gels de polyacrylamide, le système de coulée mPAGE® Lux nécessite toujours l'utilisation de consommables en plastique et de réactifs dangereux. Bien qu'il n'existe pas de remplacement approprié pour l'acrylamide dans cette application, tous les risques chimiques restants ont été éliminés de ce système et la quantité de consommables en plastique requise est considérablement réduite par rapport au système de base.
La masse supplémentaire de la station de polymérisation de gel requise par le système de coulée mPAGE® Lux est compensée par la réduction des produits requis dans le flux de travail de coulée de gel, comme l'indique le graphique. Pendant toute la durée de vie de l'instrument, la masse totale du système est réduite d'au moins 20 % par rapport aux systèmes de coulée rapide.
Masse du système pendant toute la durée de vie (kg) pour la coulée de 500 gels/an:
Figure 9.Comparaison de la masse du système pendant toute sa durée de vie (kg) pour la coulée de 500 gels/an pour le système de coulée mPAGE® Lux et le système de produit de référence. Bleu foncé = système de référence. Bleu clair = Système de coulée mPAGE® Lux.
En outre, ce produit adhère aux principes de l'emballage SMASH, notre stratégie visant à améliorer la durabilité des emballages en réduisant les emballages, en utilisant des matériaux plus durables et en facilitant le recyclage.
- L'emballage des produits et des articles supplémentaires requis pour une unité fonctionnelle est réduit de 30 % par rapport au système de référence.
- 100 % des emballages à base de fibres du système ont une certification de foresterie durable.
- Tous les inserts en mousse de protection sont fabriqués à partir de polyéthylène 100 % recyclé.
- L'emballage ne contient aucun matériau susceptible d'entraver le recyclage tel que défini par nos directives SMASH.
mPAGE® Lux Casting System Distribution and Product Use
La réduction des consommables nécessaires et l'élimination de certains réactifs entraînent une diminution significative des impacts associés à l'expédition. La réduction de la masse des composants régulièrement expédiés et des emballages associés est d'au moins 24 % sur la durée de vie minimale de l'instrument
.
En coulant des gels frais et prêts à l'emploi en fonction des besoins, le risque de préparer à l'avance des gels qui resteront inutilisés est éliminé. Le système mPAGE® Lux élimine la nécessité de stocker des kits de réactifs ou des gels pré-coulés en différents pourcentages, ce qui réduit la quantité de déchets générés en raison de la péremption des composants. La station de polymérisation mPAGE® Lux est un équipement électronique et, en tant que tel, doit être mis au rebut conformément à toutes les réglementations applicables. Pour plus d'informations sur l'élimination des déchets électroniques, visitez notre page de conformité DEEE.
Ce produit a démontré des améliorations significatives par rapport au système de base tout au long du cycle de vie du produit et a été désigné comme un produit alternatif plus vert. Pour plus d'informations, visitez notre page sur notre cadre de conception pour le développement durable et nos produits alternatifs plus écologiques.
La page de conformité à la directive DEEE
Ce produit a démontré des améliorations significatives par rapport au système de référence tout au long du cycle de vie du produit.
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