ChemiScreen D₅ ドーパミン受容体膜製剤

さまざまな量の D₅ 膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値：

	10 µg/ウェル
シグナル：バックグラウンド	4.06
特異的結合（cpm）	1952

仕様：1 ユニット = 10 µg
[³H] SCH 23390 結合のBmax：11.42 pmol/mg タンパク質、
[³H] SCH 23390 結合の Kd： ~ 2.25 nM

タンパク質標的：D5

インキュベーション条件
非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、GF/C 96 ウェルフィルタープレートを 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50mM HEPES、pH7.4、0.5% BSA で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。
結合緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、5 mM MgCl2、1 mM 、CaCl2、0.2% BSA、ろ過後、4°C で保存
放射性リガンド：[³H]-SCH 23390。（Perkin Elmer#:NET-930）
洗浄緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、500mM NaCl、0.1% BSA、ろ過後、4°Cで保存。.
各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、0.5 nM の³H 標識 SCH 23390 で 3 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

EP_{5 をコードする全長ヒト DRD5 cDNA}

ドーパミンはカテコ-ルアミン系の神経伝達物質で、中枢神経系では運動、認知、情動、神経内分泌のプロセスを制御し、末梢神経系では心臓血管、腎臓、消化管のプロセスを調節します。 ドーパミンの生物学的活性は、5 種類の GPCR ファミリーによって媒介されます。 D₁ および D₅ サブタイプは Gs に結合して細胞内cAMPを増加させ、D₂、D₃ および D₄ サブタイプは G_i に結合して cAMP を減少させます（Missale et al., 1998）。 標的 D₅ の欠損マウスの高血圧表現型は、D₅ が交感神経血管緊張の中枢制御を司っていることを示しています（Hollon et al., 2002）。 また、D₅ は運動と皮質線条体系の長期抑圧も調節しています（Centonze et al., 2003）。 Chemicon′のクローン化ヒト D₅ 発現細胞株は、Chem-1 宿主で生産されています。この宿主は、細胞表面で高レベルの組換え D₅ 発現をサポートし、受容体をカルシウムシグナル伝達経路に結合させるための、異所性 G タンパク質 Gα15 を多量に含んでいます。 したがって、この細胞株は、D₅ とそのリガンドとの相互作用のアンタゴニストをスクリーニングするための理想的なツールです。 この膜製剤は [³H]-SCH 23390 に対して 2.25 nM の Kd を示します。 0.5 nM の [³H]-SCH 23390 で、10µg/ウェルの D₅ 膜製剤は 3 倍以上のシグナル/バックグラウンド比を示します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。包装方法：膜タンパク質は 1 mL の包装緩衝液で 1 mg/mL に調整し、急速凍結して -80 ℃ で保存したものです。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany