抗DNA-RNAハイブリッド抗体、クローンS9.6

DNA-RNAハイブリッドは真核細胞内で自然に発生し、その濃度は転写活性の高い部位で高くなります。転写調節機能を備えた非標準的な核酸構造です。存在すると、遺伝子座に染色体切断が生じやすくなると報告されています。DNA:RNAを形成する遺伝子座は、相補的に置換されたDNA鎖上に一本鎖核酸結合タンパク質の第2のターゲットを有する、二本鎖A/B中間構造を形成します。これらは、DNAメチルトランスフェラーゼ活性に耐性があることが示されています。DNA:RNAハイブリッドの形成は、多くの神経疾患と関連付けられています。DNA:RNAヘリカーゼセナタキシン（SETX）の変異は，筋萎縮性側索硬化症4型の優性若年型および眼球運動失行を伴う失調症2型の劣性型に関与しています。

DNA依存性RNAポリメラーゼを用いたphi X174一本鎖DNAの転写により調製したDNA-RNAヘテロポリマー二本鎖（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

ドットブロット解析：0.2 µg/mLで使用、RNase H欠損酵母株からのゲノム抽出物で、野生型株からの抽出物よりも高いレベルのDNA-RNAハイブリッドを検出できます（Lorenzo Costantino, Ph.D., Koshland Lab, University of California at Berkley, U.S.A.のご厚意による）。

アフィニティー結合アッセイ：クローンS9.6はDNA-RNAヘテロポリマーおよびポリ(I)-ポリ(dC)に同等に結合しましたが、同程度の結合を達成するには、100倍高い濃度のポリ(A)-ポリ(dT)が必要でした。クローンS9.6は、一本鎖DNA、二本鎖DNAおよびRNA、リボソームRNAには結合しませんでした（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

クロマチン免疫沈降（ChIP）：代表的なロットは、HeLa細胞で、活発に転写される4つの遺伝子におけるDNA RNAハイブリッドの増加を、BRCA1またはBRCA2のshRNA媒介ノックダウン時には検出しましたが、PCID2またはRAD51のノックダウン時には検出しませんでした（Bhatia, V., et al. (2014).Nature.511(7509):362-365）。

クロマチン免疫沈降（ChIP）：代表的なロットは、HeLaクロマチン調製物を用いて、ベータアクチン遺伝子で形成されたRループを検出しました。クロマチン調製物をRNase H処理すると、クローンS9.6による標的クロマチンフラグメントの免疫沈降が阻害されました（Skourti-Stathaki, K., et al. (2011).Mol. Cell. 42(6):794-805）。

クロマチン免疫沈降シーケンス（ChIP-seq）：代表的なロットは、ChIP-seq分析により、出芽酵母におけるDNA-RNAハイブリッドのゲノム全体に渡る分布を検出しました（El Hage, A., et al. (2014).PLoS Genet. 10(10):e1004716）.

免疫細胞染色：代表的なロットは、メタノール固定H1ヒト胚性幹細胞（hESCs）およびホルムアルデヒド固定HeLa細胞の蛍光免疫細胞染色により、核Rループの免疫局在性を評価しました。（Bhatia, V., et al. (2014).Nature.511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012).Mol. Cell. 45(6):814-825）。

免疫沈降：代表的なロットは、in vitro転写されたRループ基質（DNA-RNAハイブリッド）を免疫沈降させましたが、二本鎖DNA（dsDNA）は免疫沈降させませんでした（Ginno, P.A., et al. (2012).Mol. Cell. 45(6):814-825）。

抗DNA-RNAハイブリッド、クローンS9.6、カタログ番号MABE1095は、DNA-RNAハイブリッドを特異的に検出するマウスモノクローナル抗体であり、アフィニティー結合アッセイ、クロマチン免疫沈降（ChIP）、ChIP-seq、ドットブロット、免疫細胞染色、および免疫沈降でテストされています。

研究カテゴリー
エピジェネティクス・核内機能分子

クローンS9.6はDNA-RNAヘテロポリマーおよびポリ(I)-ポリ(dC)に同等に結合しましたが、同程度の結合を達成するには、100倍高い濃度のポリ(A)-ポリ(dT)が必要でした。クローンS9.6は、一本鎖DNA、二本鎖DNAおよびRNA、リボソームRNAには結合しませんでした（Boguslawski, S.J., et al. (1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130）.

標的のDNA-RNAヘテロ二本鎖（Rループ）構造は、配列特異的または種特異的ではありません。

0.1 Mトリス-グリシン（pH 7.4）、150 mM NaCl、0.05%アジ化ナトリウムを含むバッファー中の精製マウスIgG2aκ。

フォーマット：精製

精製プロテインG。

2～8°Cで受領日から1年間安定です。

HeLa細胞の免疫細胞染色で評価されています。

免疫細胞染色：希釈倍率1:50で使用、4%パラホルムアルデヒド固定、0.3% Triton X-100透過処理HeLa細胞において、核およびミトコンドリアDNA-RNAハイブリッドの免疫局在性を評価しました。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

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