usage
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
PCR: suitable
storage temp.
−20°C
General description
PCR DIG プローブ合成キットには、アルカリに不安定なジゴキシゲニン（DIG）-11デオキシウリジン三リン酸（dUTP）が含まれています。このキットは、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）において感受性の高いプローブである、DIG標識化DNAプローブを簡便かつ効率的に生成します。プローブは、PCRの手法により、（アルカリに不安定な）DIG-11dUTPで標識されます。DIG-dUTPとdTTPの比率は1：2です。
PCR DIGプローブ合成キットには、Expand High Fidelity DNAポリメラーゼミックスが含まれています。プルーフリーディング活性を有する、この堅牢な酵素ミックスは、10 pgプラスミドDNAと10 ngゲノムDNAをテンプレートとして用いて、長さ40 bpから5 kbまでのプローブを重合します。DIG標識化プローブは、1年以上安定です。
PCR DIGプローブ合成キットには、Expand High Fidelity DNAポリメラーゼミックスが含まれています。プルーフリーディング活性を有する、この堅牢な酵素ミックスは、10 pgプラスミドDNAと10 ngゲノムDNAをテンプレートとして用いて、長さ40 bpから5 kbまでのプローブを重合します。DIG標識化プローブは、1年以上安定です。
Application
PCR DIGプローブ合成キットにより生成されたジゴキシゲニン（DIG）標識化DNAプローブは、サザンブロット法およびノーザンブロット法においてまれなmRNAの低（単一）コピー遺伝子の検出に適しています。DIG標識化DNAプローブは、in situでのハイブリダイゼーション中にDNAを標識することにも使用されています。
提供されるdUTP-ヌクレオチドミックスの濃度は、プローブの長さによって調節できます。標識化の効果は、アガロースゲル上で迅速に確認できます。
膜の剥離と再プローブは、添付文書のプロトコールに従って複数回行うことが可能です。
1回のPCR標識反応（50 μL）により通常、20 mLのハイブリダイゼーション溶液に十分なプローブが作成されます。本キットは、約25回分の反応（50 μL）に使用できます。
提供されるdUTP-ヌクレオチドミックスの濃度は、プローブの長さによって調節できます。標識化の効果は、アガロースゲル上で迅速に確認できます。
膜の剥離と再プローブは、添付文書のプロトコールに従って複数回行うことが可能です。
1回のPCR標識反応（50 μL）により通常、20 mLのハイブリダイゼーション溶液に十分なプローブが作成されます。本キットは、約25回分の反応（50 μL）に使用できます。
Packaging
1つのキットには6のコンポーネントが含まれています。
Analysis Note
PCR DIGプローブ合成キットの各ロットは、PCRによって機能テスト済みです。増幅生成物は、ゲノミックサザンブロットにおいて分析されます。
パッケージ内の説明書に記載のPCR条件において、コントロール反応により、442 bpの増幅生成物が得られます。PCRプロセスにおける複数のDIG-dUTPの取り込みにより、PCR生成物の分子量は、非標識の場合と比べて大幅に増加します。10 μgのヒトゲノムDNAのPCR生成物のハイブリダイゼーション後、化学発光検出により、特定のフラグメントパターンが検出されます。
パッケージ内の説明書に記載のPCR条件において、コントロール反応により、442 bpの増幅生成物が得られます。PCRプロセスにおける複数のDIG-dUTPの取り込みにより、PCR生成物の分子量は、非標識の場合と比べて大幅に増加します。10 μgのヒトゲノムDNAのPCR生成物のハイブリダイゼーション後、化学発光検出により、特定のフラグメントパターンが検出されます。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
- PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
- PCR Buffer with MgCl2 10x concentrated
- dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
- Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
- Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each
hcodes
pcodes
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 3
保管分類
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 2
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