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Merck

C5138

コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

別名:

クロストリジオペプチダーゼA

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この商品について

CAS番号:
9001-12-1
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.54
EC Number:
232-582-9
MDL number:
MFCD00130830
EC Number:
3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)

主要文書

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製品名

コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来, suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

biological source

Clostridium histolyticum

form

powder

specific activity

≥125 CDU/mg solid
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

mol wt

68-130 kDa

technique(s)

cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

solubility

TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C

suitability

suitable for release of physiologically active rat hepatocytes

application(s)

diagnostic assay manufacturing

shipped in

wet ice

storage temp.

−20°C

Quality Level

200

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Application

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは、次の用途に使用されています：
  • 腫瘍組織の消化のためのコラゲナーゼ液の調製
  • 摘出された腸間膜脂肪組織の消化のためのリン酸緩衝生理食塩水のサプリメントとして
  • 結腸セグメントの消化のためのロズウェルパーク記念研究所培地（RPMI-1640）のサプリメントとして
  • 子宮内膜組織の消化のため
  • 被膜を除去した精巣の消化のための酵素Aおよび酵素Bの調製
コラゲナーゼは、終末糖化産物(AGE)研究のための動脈組織の調製に使用されています。この酵素は、その他のプロテアーゼと共に、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒトの脳、肺上皮およびその他多くの組織の脱凝集にも使用されています。また、肝臓と腎臓の潅流研究、膵臓の消化、および非実質肝細胞の単離にも有効です。本酵素は、肝細胞の遊離における適性を、各ラット肝臓に対して濃度約1 mg/mL、全液量100 mLで試験されています。

シーケンス用の単一細胞懸濁液の調製における使用に適しています。

Biochem/physiol Actions

クロストリジウム属細菌（Clostridium histolyticum）は、2種類のコラゲナーゼを産生します。クロストリジウム属由来のコラゲナーゼは、哺乳類由来のコラゲナーゼよりも効率が良いです。コラーゲン三重ヘリックス内の複数の切断部位で切断します。クロストリジウム属由来のコラゲナーゼは、ガス壊疽への細菌侵入に関与しています。
コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。
組織からの効果的な細胞の遊離には、コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの作用を必要とします。コラゲナーゼは、酵素1モルあたり4グラムのカルシウム（Ca2+）原子によって活性化されます。培養濾液は、分子量68～130 kDaの間の、少なくとも7つの異なるプロテアーゼを含んでいると思われます。至適pHは6.3～8.8です。本酵素は、通常、組織サンプル中の結合成分を消化し、個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラゲナーゼ処理により、幾つかの細胞が死ぬことがあります。通常、消化に使用する濃度は0.1～5 mg/mLの範囲です。反応時間は15分から数時間までと異なり、過剰な細胞死を引き起こすことなく、十分な細胞の解離を得ることができます。カルシウムおよびBSAを含むKrebs Ringerバッファーが望ましく、Zn2+が活性に必要です。

Disclaimer

供給時点でのこの製品は－20℃で6年間安定です。37℃、50℃および－20℃では、30日間でFALGPAまたはプロテアーゼ活性が減少することはありません。粗コラゲナーゼ溶液は、アリコット（10 mg/mL）で急速凍結し、－20℃で凍結維持すれば安定です。さらに凍結・融解サイクルを繰り返すと、溶液が損傷を受けます。 この製品は、氷上に保つと100%の活性を7時間にわたって保持します。

Other Notes

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

Preparation Note

溶液は通常、TESCAバッファーにより、1～2 mg/mLで調製されます（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含む、37°CでpH 7.4）。
また本製品は、クロストリパイン、中性プロテアーゼ、およびトリプシン活性を含みます。

pictograms

Health hazardExclamation mark
GHS08,GHS07

signalword

Danger

Hazard Classifications

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

target_organs

Respiratory system

保管分類

11 - Combustible Solids

wgk

WGK 1

flash_point_f

Not applicable

flash_point_c

Not applicable

ppe

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves

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試験成績書（COA）

Lot/Batch Number
0000515704
0000515704
0000515712
0000515712
0000511284

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プロトコル

FALGPA(N-(3-[2-フリル]アクリロイル)-Leu-Gly-Pro-Ala)を用いたコラゲナーゼ（EC 3.4.24.3）の酵素アッセイ

N-(3-[2-フリル]アクリロイル)-Leu-Gly-Pro-Alaを、連続分光光度法による速度測定（345 nm）で使用して、コラゲナーゼ活性を測定します。コラゲナーゼは、コラーゲンペプチド結合を加水分解します。

Enzymatic Assay of Collagenase (EC 3.4.24.3) using FALGPA (N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala)

To measure collagenase activity, N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala is used in a continuous spectrophotometric rate determination at 345 nm. Collagenase hydrolyzes collagen peptide bonds.

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